灵芝免疫调节蛋白lz28基因的克隆与表达 - 河北师范大学学报.pdf

第 33 卷/ 第 5 期/ 河北师范大学学报/ 自然科学版/ Vol . 33 No . 5 2009 年 9 月 J OURNAL OF HEBEI NORMAL UNIVERSITY/ Natural Science Edition/ Sep . 2009 灵芝免疫调节蛋白L Z8基因的克隆与表达 1 2 1 1 1 1 李世丽 , 　胡亚平 , 　苏建臣 , 　宋 　杰 , 　郭雅玮 , 　齐志广 ( 1. 河北师范大学 生命科学学院 ,河北 石家庄 　0500 16 ; 2 . 邢台医学高等专科学校 基础部 ,河北 邢台　054000) 摘 要 :灵芝能够调节和增强机体免疫力 ,具有极高的药用价值 ;L Z8蛋白是最早被分离研究的免疫调节蛋 白,它不仅是灵芝生命活动的重要物质而且具有独特免疫原性. 实验采用 CTAB 法提取灵芝基因组 DNA , PCR 扩 增全长 lz 8基因;利用 X ba Ⅰ, X ho Ⅰ位点将 lz 8编码基因片段克隆到原核表达载体 p ET28 a 中 ,构建原核重组表 ( ) 达质粒 p ET lz 8 ,转化 BL2 1 D E3 并进行 SDSPA GE 及 Westernblot 分析. 结果表明:克隆的 lz 8基因与 GenBank 报道的序列同源性达到 87 . 5 %～100 % ;重组菌株经 IP T G 诱导后 , lz 8基因得到了高效表达 , 目的蛋白表达量可 达菌体总蛋白的 36 . 52 %. 关键词 :灵芝 ; lz 8 ; 克隆与表达 ; Westernblot 中图分类号 :Q 939 . 93 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 (2009) ( ) ( ) ( ) ( 灵芝 Ganoder m a l uci d u m 属于担子菌纲 Basidiomycetes 多孔菌 目 Polyporales 灵芝科 Ganodermat aceat) ,是一种珍贵的药用真菌. 灵芝的活性成分主要为灵芝多糖 、三萜和蛋白质 , 以及腺苷 、有机酸 、生物碱 等[ 1 ] ;前人的研究中 ,对多糖和三萜研究较多 ,而对蛋白质的研究相对较少. 多糖最早被确定[2 ] ,其主要功能 是防癌抗癌[3 、4 ] ;三萜类物质又名灵芝酸 ,具有抗氧化 、抗过敏 、抗高血压 、保肝 、抗单纯疱疹病毒 、毒杀癌细 胞株等广泛的生理活性[5 ] . 近年来 ,有关分析证明灵芝中的蛋白同样有着免疫调节 、抗癌 、杀肿瘤 、抗氧化 、 抗菌 、抗病毒等活性 ,其中L Z8是被研究的较为透彻的免疫调节蛋白之一. 1989 年 , Kino 等[6 ] 从灵芝菌丝体提取物中分离到第 1 个真菌免疫调节蛋白,命名为 L Z8 ,并证明了其 免疫调节和促进细胞有丝分裂的作用[7 ] ,随后的研究证明 ,L Z8可有效抑制非肥胖糖尿病鼠自体免疫第一 型糖尿病的发生[ 8 ] ,并对 B 型肝炎表面抗原所引起的抗体有明显的抑制作用[9 ] ,而且可以使阳性鼠阿尔图 斯反应中脚肢浮肿比例下降40 %[ 10 ] . Haak 等学者研究L Z8的免疫调节机制 ,发现 L Z8具有抑制人类外周 ( )