化妆品中多西拉敏、美沙吡林、曲吡那敏等9种抗过敏药物的测定高效液 .doc

前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口。 本标准起草单位：国家化妆品质量监督检验中心、国家香料香精化妆品质量监督检验中心、国家环保产品质量监督检验中心。 本标准主要起草人： （LC-MS/MS） 本标准适用于膏霜、水剂类化妆品中多西拉敏、美沙吡林、曲吡那敏、溴苯那敏、苯海拉明、赛克利嗪、二苯拉林、羟嗪和氯苯沙明含量的测定。 本标准方法检出限为0.6 μg/kg，定量限为2.0 μg/kg。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 试验方法 3.1 原理 样品用三氯乙酸溶液超声提取、离心后，上清液经固相萃取小柱净化，用液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。 3.2 试剂和标准物质 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 3.2.1 甲醇：色谱纯。 3.2.2 乙腈：色谱纯。 3.2.3 10%甲醇水溶液：准确移取10mL甲醇和90mL水，混匀后备用。 3.2.4 1%三氯乙酸溶液: 称取1g三氯乙酸，用100mL水溶解后备用。 3.2.5 混合型阳离子交换固相萃取小柱：60mg，3mL，或相当者。使用前依次用3mL甲醇、3mL水活化。 3.2.6 微孔滤膜：0.22μm，有机相。 3.2.标准品：多西拉敏、美沙吡林、曲吡那敏、溴苯那敏、苯海拉明、赛克利嗪、二苯拉林、羟嗪和氯苯沙明的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量及结构式参见附录A，纯度不小于98％。 3.2.8 标准储备液：准确称取适量标准品（3.2.7）于50 mL容量瓶中，用甲醇水溶液（3.2.3）分别溶解并定容至刻度，配制成浓度为100 mg/L的标准储备液，于4℃避光保存，有效期2个月。 3.2.9 5%氨化甲醇：准确移取5mL氨水和95mL甲醇，混匀后备用。 3.3.1 液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源（ESI）。 3.3.2 分析天平：感量为0.0001g和0.01g。 3.3.3 离心机：转速不低于10000 r/min。 3.3.4 超声波清洗机。 3.3.5 固相萃取装置。 3.3.6 氮气吹干仪。 3.3.7 涡旋混合器。 3.3.8 具塞塑料离心管：15mL。 3.4.1 提取 称取试样约0.5 g (精确至0.1 mg)于15 mL具塞塑料离心管中，加入10 mL 三氯乙酸溶液（3.2.4）和0.5 g NaCl，涡旋分散均匀后，超声提取 min，以10000 r/min离心 min，准确移取5mL上清液，加入5mL水混匀后做待净化液。 3.4.2 净化 将3.4.1中的待净化液转移至固相萃取小柱（3.2.5）中依次用3 mL水和3 mL甲醇洗涤，减压抽干，用5mL氨化甲醇（3.2.9）洗脱，收集洗脱液。在40℃水浴中用氮气吹至近干，加入1.0 mL，在涡旋混合器上混合1min后，过微孔滤膜（3.2.6），滤液待测。 3.5.1 液相色谱参考条件 a) 色谱柱：C18柱，100mm×2.1mm（i.d.），5μm，或相当者。 b) 流动相：A：甲醇，B：0.1%甲酸溶液（含5.0 mmol/L甲酸铵），梯度洗脱，梯度条件见表1。 c）柱 温：30℃。 d) 进样量：5μL。表1梯度洗脱程序表 时间（min） B A 流速/(mL/min) 0 6 10 10.1 80% 20% 20% 80% 20% 80% 80% 20% 0.30.30 0.30 0.30 3.5.2 串联质谱参考条件 a) 电离方式：电喷雾电离，正离子模式； b) 喷雾电压：3.0kV； c) 雾化温度：250℃； d）毛细管温度：350℃； e) 鞘气压力：45Arb； f) 辅助气压力：12Arb； g) 碰撞气：氩气； h) 扫描模式：选择反应监测（SRM）模式，9种抗过敏药物的质谱参数见表2。 表2 质谱参数 序号 药物名称 保留时间/min 监测离子对 透镜电压/V 碰撞能量/eV 1 2 3 4 5 6 7 8 9 多西拉敏 美沙吡林 曲吡那敏 溴苯那敏 苯海拉明 赛克利嗪 二苯拉林 羟嗪 氯苯沙明 3.74 4.21 4.58 5.15 5.25 5.43 5.66 6.23 6.40 271.1→167.1* 182.2 262.2→119.3* 217.1 256.2→120.2* 211.2 319.1→167.1* 194.2 256.2→152.2* 167.1 267.1→152.1* 167.1 282.2→152.2* 165.1 375.2→165.1* 201.1 304.2→179.1* 215.1 47 52 54