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鳗弧菌(vibrio anguillarum)m3菌株生长条件及其对蛋白酶产量的影响
维普资讯
第 35卷 第2期 海 洋 与 湖 沼 Vo1.35.No.2
2004年 3月 OCEANOLOGIA ET L1MNOLOGIA SINICA Mar.,2004
鳗弧菌 (Vibrioanguillarum)M3菌株生长条件
及其对蛋 白酶产量的影响*
陈师勇 张培军 莫照兰 邹玉霞 张振冬 徐永立
(中国科学院海洋研究所实验海洋生物学开放研究实验室 青岛 266071;
中国科学院研究生院 北京 100039)
(中国科学院海洋研究所实验海洋生物学开放研究实验室 青 岛 266071)
提要 采用体 外测定细菌浓度、胞外产物 (ECP)蛋 白含量和蛋 白酶活力 的方法,进行 了鳗弧
菌 M3菌株在2216E培养基 中的培养条件研究。结果表明,该菌株用固体培养基培养至24h左
右,可得到较高 的菌体浓度、ECP蛋 白含量和蛋 白酶活力。采用响应面分析方法设计实验 ,用
SAS统计软件分析数据,得到 NaC1浓度、pH值和温度对菌体生长及蛋 白酶产量影响的回归模
型。在 2216E培养基 的基础上,添加不同氮源、碳源物质 以及不 同浓度蛋 白胨进行生长研究。
结果表明,胰大豆蛋 白胨能促进菌体生长及 ECP蛋 白分泌;NH4C1与酪蛋 白水解物可抑制蛋 白
酶的产生;牙鲆肌 肉匀浆对菌体 、ECP蛋 白产量和蛋 白酶产生有不同程度 的促进作用 ;培养基
中蛋 白胨浓度为4%时菌体量与ECP蛋 白含量达最高值,在蛋 白胨浓度为2%时蛋 白酶分泌量
已稳定;1%的葡萄糖、蔗糖 、甘油均能显著地提高菌体及 ECP蛋 白产量,却抑制 了蛋 白酶的
产生 。
关键词 鳗弧菌,蛋 白酶,响应面分析,胞外产物 ,生长
中图分类号 $936
鳗弧菌 (Vibrioar~dllarum)是引起水产养殖动物 分离出一株鳗弧菌强毒性株,命名为 M3(Moeta/。
流行性疾病的一种重要病源,曾在世界范围内引起养 2001),发现其胞外产物 (ECP)具有强致病性 (Mo a/.
殖鱼类 的流行病爆发 (Lightner,1977;Mahnken,1975)。 2OO2),并从中分离纯化到一种毒性极强的金属蛋白酶
牙鲆( ^ olivaceus)是一种重要海水经济鱼类, (陈师勇等,2OO2)。为进一步了解鳗弧菌M3致病机制、
在中国北方沿海地区已形成较大的工厂化养殖规模, 研制疫苗,以及研究此金属蛋白酶在鳗弧菌 M3致病过
近年来在其遗传、生态等方面已有较多报道 (尤 锋等, 程中所起的作用,首先需要大量培养菌体以及从ECP
1999;徐 成等,2OO2)。但 由于其养殖规模的逐年扩大 中分离金属蛋白酶。为此,作者对鳗弧菌 M3的生长条
和养殖密度的提高,出现了多种疾病,其中以细菌病最 件及其胞外产物中金属蛋白酶产生条件进行了研究。
为重要,导致严重的经济损失(莫照兰等,2001、2003)。 鉴于酶活力的高低在一定程度上反映出金属蛋 白酶含
量的变化,作者通过测定 ECP中总酶活力来判断金属
至今,人们已发现了多种鳗弧菌毒力 因子,如:铁获取
蛋白酶产生的最佳条件。
系统(Actiseta/,1988)、外膜蛋白(Mazoyeta/,1996)、脂
多糖(Austineta/,1995)、蛋白酶(Norqvistetal,1990)、鞭 1 材料与方法
毛(Miltonetal,1996)、溶血素(Hironoeta/,1995)等。在 1.1 菌体培养及胞外产物的获得
山东荣成寻山养鱼场 ,作者从濒临死亡的患病牙鲆中 鳗弧菌M3接种于2216E液体培养基 ,28℃摇床
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