鳗弧菌（vibrio anguillarum）m3菌株生长条件及其对蛋白酶产量的影响.pdf

维普资讯 第 35卷 第2期 海 洋 与 湖 沼 Vo1．35．No．2 2004年 3月 OCEANOLOGIA ET L1MNOLOGIA SINICA Mar．，2004 鳗弧菌 (Vibrioanguillarum)M3菌株生长条件 及其对蛋 白酶产量的影响* 陈师勇 张培军 莫照兰 邹玉霞 张振冬 徐永立 (中国科学院海洋研究所实验海洋生物学开放研究实验室 青岛 266071； 中国科学院研究生院 北京 100039) (中国科学院海洋研究所实验海洋生物学开放研究实验室 青 岛 266071) 提要 采用体 外测定细菌浓度、胞外产物 (ECP)蛋 白含量和蛋 白酶活力 的方法，进行 了鳗弧 菌 M3菌株在2216E培养基 中的培养条件研究。结果表明，该菌株用固体培养基培养至24h左 右，可得到较高 的菌体浓度、ECP蛋 白含量和蛋 白酶活力。采用响应面分析方法设计实验 ，用 SAS统计软件分析数据，得到 NaC1浓度、pH值和温度对菌体生长及蛋 白酶产量影响的回归模 型。在 2216E培养基 的基础上，添加不同氮源、碳源物质 以及不 同浓度蛋 白胨进行生长研究。 结果表明，胰大豆蛋 白胨能促进菌体生长及 ECP蛋 白分泌；NH4C1与酪蛋 白水解物可抑制蛋 白 酶的产生；牙鲆肌 肉匀浆对菌体 、ECP蛋 白产量和蛋 白酶产生有不同程度 的促进作用 ；培养基 中蛋 白胨浓度为4％时菌体量与ECP蛋 白含量达最高值，在蛋 白胨浓度为2％时蛋 白酶分泌量 已稳定；1％的葡萄糖、蔗糖 、甘油均能显著地提高菌体及 ECP蛋 白产量，却抑制 了蛋 白酶的 产生 。 关键词 鳗弧菌，蛋 白酶，响应面分析，胞外产物 ，生长 中图分类号 $936 鳗弧菌 (Vibrioar~dllarum)是引起水产养殖动物 分离出一株鳗弧菌强毒性株，命名为 M3(Moeta／。 流行性疾病的一种重要病源，曾在世界范围内引起养 2001)，发现其胞外产物 (ECP)具有强致病性 (Mo a／． 殖鱼类 的流行病爆发 (Lightner，1977；Mahnken，1975)。 2OO2)，并从中分离纯化到一种毒性极强的金属蛋白酶 牙鲆( ^ olivaceus)是一种重要海水经济鱼类， (陈师勇等，2OO2)。为进一步了解鳗弧菌M3致病机制、 在中国北方沿海地区已形成较大的工厂化养殖规模， 研制疫苗，以及研究此金属蛋白酶在鳗弧菌 M3致病过 近年来在其遗传、生态等方面已有较多报道 (尤 锋等， 程中所起的作用，首先需要大量培养菌体以及从ECP 1999；徐 成等，2OO2)。但 由于其养殖规模的逐年扩大 中分离金属蛋白酶。为此，作者对鳗弧菌 M3的生长条 和养殖密度的提高，出现了多种疾病，其中以细菌病最 件及其胞外产物中金属蛋白酶产生条件进行了研究。 为重要，导致严重的经济损失(莫照兰等，2001、2003)。 鉴于酶活力的高低在一定程度上反映出金属蛋 白酶含 量的变化，作者通过测定 ECP中总酶活力来判断金属 至今，人们已发现了多种鳗弧菌毒力 因子，如：铁获取 蛋白酶产生的最佳条件。 系统(Actiseta／，1988)、外膜蛋白(Mazoyeta／，1996)、脂 多糖(Austineta／，1995)、蛋白酶(Norqvistetal，1990)、鞭 1 材料与方法 毛(Miltonetal，1996)、溶血素(Hironoeta／，1995)等。在 1．1 菌体培养及胞外产物的获得 山东荣成寻山养鱼场 ，作者从濒临死亡的患病牙鲆中 鳗弧菌M3接种于2216E液体培养基 ，28℃摇床