融合蛋白pil6il2 在e coli 中的表达及活性鉴定.pdf

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2017-09-02 发布于天津
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融合蛋白pil6il2 在e coli 中的表达及活性鉴定

2411 CHINA BIOT CHNOLOGY 2004 11 pIL6IL2E . coli * * * 严琳卿柳庭贝为成黄红亮陈焕春 ( 430070) 白细胞介素2(interleukin2, IL2) 与白细胞介素6( interleukin6, IL6) 能分别刺激T 淋巴细胞增殖与B 淋巴细胞分泌免疫球蛋白, 从而促进动物机体的细胞免疫与体液免疫; 另 IL2 与 IL6 在发挥生物学活性时还有相互协同作用因此, 将去除信号肽的猪白细胞介素6( pIL6) 与猪白细胞介素2(pIL2) cDNAs 序列通过一段Linker 相连, 克隆到E . coli 表达载体pP T28a 中该融合蛋白IL6IL2 在 E . coli 表达菌BL21(D 3) 中获得成功表达, SDSPAG 分析分子量约为 40kDa,表达量达到总菌体的66.26%用IL6 依赖的B9 细胞与IL2 依赖的CTLL 细胞增殖试验进 3 3 行融合蛋白IL6IL2 的生物活性检测, 其活性可分别达到08 10 Umg 和64 10 Umg 猪白细胞介素6 猪白细胞介素2 E . coli 表达生物活性 IL2 IL6 Morgan( 1976) Nordan T , ; IL6 [1] (1986) B9, , IL2 IL6 T 12 B, T4DNA PCR , T DNA Marker TakaRa (TCGF) B (BCDF2) [2] rpIL2 RD (652 , IL2 IL6 , P2) , rhIL6 PeproTech C LITD MTS Promega : IL2 LAK 13 pIL6pIL2 PCR [ 3] IL6 ; IL6 G NBANK pIL2( X56750) pIL6 [4] IL2R IL2 , (M86722) E coli pIL6IL2 Primer A: 5 gcGAGCTCccgggacgcctggaagaag3 ; , Primer B: 5 cgCAATTGggaacctccacctcccattatccgaatggccctca3 Primer C: 5 1 gcGAATTCggttctggcggtgcacctacttcaagct3 ; 11 Primer D: 5 gcGTCGACcttaattatgaagtcagt3 + + SK IL6 SK IL2 A BpIL6 cDNA, ;