蛋白质系列包涵体蛋白溶解及复性试剂盒.pdf

蛋 CAT# ：100302-100 常温运输和保存 白 质 系 列 包涵体蛋白溶解及复性试剂盒 Inclusion Body Solubilization and Refolding Kit 使用手册V1.0 北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区上地信息路26 号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦506 网址： ；电话：400-6765278 ；电邮：order@ 产品及特点 本产品用E.coli 作为宿主表达得到的重组蛋白往往会形成包涵体，其中的重 组蛋白质只完成部分折叠，还没形成最后的正确空间结构，所以没有生物活性，要 得到有活性的重组蛋白，还需要后续的溶解和复性（重折叠）处理。目前最常用的 溶解包涵体的方法是用尿素，Sarkosyl，盐酸胍等强变性剂，其缺点是包涵体中的 重组蛋白质被彻底变性，使后续的蛋白质复性处理效率降低。本产品根据包涵体中 的重组蛋白质已经完成了部分折叠这一实事设计，具有下列特点： 1. 一站式，提供包涵体洗涤、溶解和蛋白质复性的所有试剂。 2. 采用温和法溶解包涵体，释放的包涵体蛋白质不彻底变性，还能保持其部分折 叠的结构，使后续的复性处理效率提高。 3. 所用复性液基于稀释复性，经过精心优化，有利于大部分蛋白的复性。 4. 还提供五种不同的添加剂，它们可以单独加入复性液，也可以按一定比例进行 自由组合，以适应不同的蛋白质折叠需求。 5. 本试剂盒提供实惠的小规格，用于做预实验用，用户如果选择到合适的溶液组 合后，可以单独购买其中的溶液以用于大量制备。 6. 本试剂盒足够 100 次小规模（1mL规模）的蛋白质复性实验。 规格及成分 成 份 编 号 100 次包装 包涵体洗涤液 100302A 250 mL 包涵体温和溶解液（10种各一套） 100302B 10×10 mL 包涵体蛋白质复性液 100302C 250 mL 使用手册 100302sc 1 份 运输及保存 常温运输和保存，有效期一年。 自备试剂 去离子水、BCA 蛋白浓度测定试剂盒、0.22 um 注射器式滤膜 使用方法 一、洗涤包涵体 说明：用常规方法得到的包涵体常常含有去污剂和细胞碎片，因此需要经过充分的 洗涤才能用于本实验。 1. 将 10mg 包涵体沉淀溶解在5mL 包涵体洗涤液中，超声波处理8 次或充分吹 打混匀。可以适当留取 10-30uL 作为SDS电泳样品待用。 2. 4℃ 12000 rpm 离心20 分钟后弃上清。 3. 重复上面的洗涤步骤3 次，每次留取10-30uL 作为SDS电泳样品待 用。 4. 将包涵体沉淀溶解在1 mL 包涵体洗涤液中，超声波处理8 次或充分吹打混匀。 5. 检查包涵体的纯度：将上步得到的包涵体溶液和前几步得到的预留样品一起用 于SDS电泳，检查每次洗涤去除杂带的情况。 6. 检查包涵体的浓度：用自备的BCA 蛋白检测试剂盒测试第4 步得到的包涵体