第十章血清(浆)脂类及脂蛋白测定.doc

第九章 血清（浆）脂类及脂蛋白测定 血清(浆)脂类简称血脂。其成分主要包括有甘油三酯、胆固醇、胆固醇酯、磷脂、糖脂、游离脂肪酸等，均以溶解度较大的脂蛋白复合体形式存在于血液中，血浆脂蛋白根据密度不同分为高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)、极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein, VLDL)、乳糜微粒(chylomicrons, CM)等；载脂蛋白是血浆脂蛋白的蛋白质部分，各类脂蛋白中均含有一种或几种不同的特异性载脂蛋白。血脂测定可及时地反映体内脂类代谢状况，也是临床常规分析的重要指标。在临床上，对这些成分的检测由来已久，就方法学而言有化学法、酶法、免疫化学比浊法、电泳法、超速离心法等。本章根据教学和临床实际需要，介绍一般常用的基础检测方法，并就方法学的优缺点、发展趋势进行简要评价。 第一节 血清甘油三酯的测定 甘油三酯(triglyceride, TG)的测定分为化学法和酶法。化学法可使用正庚烷-异丙醇混合溶剂等从血清中抽提出甘油三酯，再经过皂化、氧化，由显色反应进行测定。乙酰丙酮显色法是目前常用的化学法。酶法测定甘油三酯具有简便、快速、微量且试剂较稳定等优点，适用于手工和自动化测定。 实验48 乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯 【原理】 血清甘油三酯经过正庚烷-异丙醇混合溶剂抽提，用氢氧化钾皂化生成甘油，在过碘酸的作用下甘油被氧化为甲醛，当有铵离子存在时，甲醛和乙酰丙酮发生缩合反应生成带荧光的黄色物质即3，5-二乙酰-1，4-二氢二甲基吡啶(Hantgsch反应)，反应液的颜色深浅与TG浓度成正比。 【试剂】 1．抽提液　正庚烷(AR)和异丙醇(AR)以4：7(V/V)比例混合均匀。 2．40 mmol/L H2SO4溶液　浓硫酸 2.24 ml (根据比重和百分含量而定)加蒸馏水稀释至1 000 ml。 3．皂化剂 称取氢氧化钾6.0 g溶于蒸馏水60 ml中，再加异丙醇40 ml，混匀后置棕色瓶中室温保存。 4．氧化剂 称取过碘酸钠65 mg，溶于蒸馏水约50 ml中，再加入无水醋酸铵7.7 g，溶解后加冰醋酸6 ml，最后加蒸馏水至100 ml，置棕色瓶中室温保存。 5．显色剂 取乙酰丙酮0.4 ml加到异丙醇100 ml中，混匀后置棕色瓶室温保存。 6．三油酸甘油酯标准液 2.26 mmol/L (200 mg/d1) 准确称取三油酸甘油酯(平均分子量：885.4)200 mg，溶于抽提剂，以100 ml容量瓶定容，分装后置4℃冰箱保存。 【操作步骤】 按表9-1依次加入各物质。 表9-1 乙酰丙酮显色法测定甘油三酯的操作步骤 加入物 空白管 标准管 测定管 血清(ml) － － 0.2 标准液(ml) － 0.2 － 蒸馏水(ml) 0.2 － － 抽提剂(ml) 2.5 2.5 2.5 40mmol/L H2SO4(ml) 0.5 0.5 0.5 边加边摇，使之充分混匀，静置分层后， 分别准确吸取上清液于另外3支试管中 上清液(ml) 0.3 0.3 0.3 皂化剂(ml) 1.0 1.0 1.0 加入皂化剂后，充分混匀各管，56℃水浴保温5min， 然后再分别加入下列试剂 氧化剂(ml) 1.0 1.0 1.0 显色剂(ml) 1.0 1.0 1.0 加试剂后充分混匀各管，56℃水浴保温25 min，取出冷却，用分光光度计比色，于415 nm波长处，以空白管调零，测出各管的吸光度。 【计算】 血清TG(mmol/L)＝ × 标准液浓度 【参考范围】 血清TG正常范围：0.55～1.70mmol/L；临界阈值：2.30mmol/l；危险阈值：4.50mmol/L。 【临床意义】 1．血清TG增高常见于家族性脂类代谢紊乱、肾病综合征、糖尿病、甲状腺功能减退、急性胰腺炎、糖原积累病、胆道梗塞、原发性甘油三酯增高症、动脉粥样硬化等。 2．血清TG降低比较少见，慢性阻塞性肺疾患、脑梗死、甲状腺功能亢进、营养不良和消化吸收不良综合征等可引起血清TG的降低。 【注意事项】 1．血清TG易受饮食的影响，在进食脂肪后可以观察到血清中甘油三酯明显上升，2～4h内即可出现血清混浊，8h以后接近空腹水平。因此，要求空腹12h后再进行采血，并要求72h内不饮酒，否则会使检测结果偏高。 2．显色后吸光度随时间延长会有一定量的增高，故加样后要立即比色，当标本过多时，可置冰箱中逐管进行比色。 3．本方法所用试剂较稳定，室温下可保存半年，分装使用可避免因试剂污染而引起的空白值升高。 4．皂化、氧化及显色的时间和温度对吸光度均会有影响，所以每测定一批都应