第五课 诊断酶学.ppt

二、酶的结构与催化作用 单纯酶和结合酶 单纯酶：只含多肽链，是单纯蛋白质。 结合酶：由酶蛋白和辅因子组成。 两者结合后形成的复合物称为全酶。 与酶蛋白结合疏松的称为辅酶。 与酶蛋白结合牢固的称为辅基。 酶的活性中心 　　酶与底物结合并将底物转变成产物发生在酶表面的一个特定区域。 酶的催化作用机制 　　 诱导契合学说。 二、血清酶的去路 血清酶的半寿期 (T1/2) 定义： 酶失活至原来一半时所需时间。 半寿期代表酶从血中清除的快慢。半寿期长的酶，在血清中持续时间长。 血清酶的失活和排泄 酶的清除主要是在血管内失活或分解。 血清酶经蛋白酶水解产物（多肽或氨基酸） 可经小肠粘膜排至肠腔，再彻底分解成氨基酸后被重吸收，其中大部分可被组织利用，不能利用的氨基酸则随尿排出体外。 三、血清酶的生理变异 1.性别 少数酶如CK、ALP及GGT等有性别差异，与血清酶的 来源组织有关。 2.年龄 血清酶的活性随年龄而变化，ALP和GGT到老年时可有 轻度升高。年龄差异也见于同工酶。 3.进食 过量饮酒可使血清GGT明显升高。 4.运动 多种血清酶活性升高，如CK、LD、AST、ALD和ALT 等，其升高的幅度与运动量、持续时间、运动频率及 骨骼肌所含的酶量有关。 5.妊娠 胎盘组织可分泌一些酶进入母体血液，如耐热ALP、 LD、LAP和ALT（少数）等，引起血清中这些酶活性升 高。 6.其他 一些酶活性与体重、身高的增长、体位改变、昼夜变 化及家庭因素有关。 酶合成异常 合成减少 合成增多 酶释放增加: 大多数血清酶增高的主要原因 细胞内外酶浓度差异 酶蛋白分子量的大小 酶的组织分布 酶在细胞内定位和存在形式 酶的清除异常 　 不同疾病和不同的酶从血中清除时间和机制不同。 如AMY和ALP经肾脏或胆道排出异常而致血清酶升高。 二、Km与Vmax Km值：等于酶促反应的初速率为最大速率Vmax一半 时的底物浓度，即V＝?Vmax时，则Km＝[S]。Km 在临床上的应用： 　 反映酶与底物的亲合力，且与亲合力成反比。 用来计算不同底物浓度时酶促反应速度相当于最 　 　 大反应速度的百分率。 　 根据Km值选择酶的最适底物。 确定工具酶用量。 确定代谢酶系中的限速反应和作为鉴别酶的依 据。 Vmax：酶完全被底物饱和时的反应速度，代表了在一 定酶量下的最大反应速率。 三、酶促反应进程曲线 四、影响酶促反应的因素 底物浓度对酶促反应的影响 （1）当[S]Km时，反应速率与底物浓度[S]成正比，呈一级反应， V＝Vmax[S]/Km＝K[S] 用工具酶来测定各种代谢物浓度的方法学基础。 （2）当 [S]Km时，反应速率与底物浓度[S]无关， V＝Vmax＝K [E] 称为零级反应，反应速率与酶浓度[E]成正比。酶学测定时一般底物浓度可选择为Km的10～20倍。 酶活性浓度测定就是要使酶促反应的初速度（v）达到最大速度Vmax，即在过量底物存在下的零级反应期的速度，此时反应速度与酶浓度[E]之间存在线性关系。 1.按反应时间分类: 定时法 连续监测法 2.按检测方法分类： 量气法、分光光度法、荧光法 其它方法（ 放射性核素法、离子选择电极法，旋光法、极谱法、HPLC或生物发光法等）。 定时法（固定时间法） 测定酶与底物作用反应一定时间后底物或产物变化的总量，计算酶促反应平均速度。 优点：比较简单，最后测定时因酶促反应已被终止，故所用仪器无需恒温装置，显色剂的选择也可不考虑对酶活性的影响。 缺点：无法知道在整个酶促反应进程中是否都处于线性期。 利用该法测定酶活性浓度，必须保证酶和底物在所选定的温度下作用时间要非常精确，否则会引起较大误差。 连续监测法 又称速率法或动力学法，指在酶促反应过程中用仪器监测某一反应产物或底物的浓度随时间 的变化量，求出酶反应初速度，间接计算酶活 性浓度的方法。 优点： 无须终止酶促反应，不需添加其它成色试剂， 就反应物变化的多点测