人工合成多肽FGL和IKVAV促进损伤脊髓功能恢复的实验分析.pdfVIP

fIIIIII I II IIIIII IllIIIIII 6 摘 要 研究目的通过体外和体内两种方式探讨多肽FGL和IKVAV对脊髓损伤后恢复的 影响。研究方法设计并人工合成FGL和IKVAV多肽和对照肽。1①培养神经细 胞模型PC一12细胞，分为对照组和实验组．实验组中加入FGL多肽溶液。对照组 预先用多聚赖氨酸包被培养板。分别于培养1、3、5、7、9d后采用细胞增殖检 测CCK-8法检测两组细胞增殖情况。②取PC-12细胞。分为三组，正常对照组不 min， 作处理，损伤对照组加入H：O：刺激16h。实验组先加入FGL多肽预孵育30 再加H：0：刺激16h。流式细胞仪检测两组细胞凋亡情况；荧光定量PCR法检测 B PC-12中的核因子NF-KmRNA。2培养星形性胶质细胞，将细胞分为对照组和 实验组。对照组正常培养，实验组加入IKVAV人工合成多肽，检测两组细胞存活 情况。②制作细胞划伤模型，分为正常组、对照组、实验组，正常组不作任何处 理，对照组做划伤处理，实验组加入IKVAV培养一天后，制作划伤模型，三天后 鼠随机分成三组，A组为假手术组，B组为多肽FGL和IKVAV对照肽组，C组为 多肽FGL和IKVAV干预组，采用原位杂交和Western blotting免疫印迹分析脊 髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGS)NG：的表达；采用BBB评分法对大鼠瘫痪 PC—12增殖数 后肢进行运动功能评估。研究结果1实验组培养1、3、5、7、9d BmRNA的表 量均高于对照组。H：0。处理后，实验组PC-12凋亡数量及其中NF．K 达量均低于对照组。2IKVAV多肽组可存活率达95％以上，实验组和对照组细胞 活性没有明显差异，在划伤实验中，实验组细胞GDNF表达明显高于对照。．3原 NG： 位杂交和Westernblotting结果显示假A组CSPGSNG：表达较弱，B组CSPGS NG：表达明显减弱，Western 显著增多，C组给予多肽FGL干预后CSPGs blotting 结果验证了瘫痪后肢运动明显改善(均尸．以∞。结论l多肽FGL可促进．PC一12 细胞增殖，并抑制其凋亡2人工合成多肽IKVAV对细胞活性没有影响，可促进划 NG：表达促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复。 关键词：肾上腺嗜铬细胞瘤细胞；FGL多肽；星形胶质细胞；IKVAV多肽；硫酸 软骨素蛋白多糖(CSPGS)NG： Abstract ofFGLandIKVAVon cord recoverinvivo Objective：Effect peptidespinalmjury andvivtro．。 P二‘．：二oeli!Wel-t Metmmz，：二ul硼r：二m：r；edfa．oo!．rrlofle．p二．：二ceh：Tn dj、，i6eein：‘ oo奠!r(、：arlce)：D2竹nlentoj_crroHDS．the F·：二- SOIUilOI．．Contro；ffFOUljwas