试验五 微生物细胞大小和数量的测定.pptVIP

实 验 五 酵母菌形态观察及死活细胞的观察 微生物细胞大小测定 微生物数量的测定 酵母菌形态观察及死活细胞的观察；微生物细胞大小和数量的测定 目的要求 实验材料 实验程序 思考题 目的要求 观察酵母形态，加深理解酵母的形态特征 美蓝染色鉴定酵母的死活 学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。 学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。 实验材料 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、美蓝、无菌滴管、吸水纸、擦镜纸、香柏油、擦镜油。 实验程序 5- 1 :测定微生物的大小 5- 2 :测定微生物数量 5- 3 :酵母的形态特和美蓝 染色鉴定酵母的死活 实验5-1:酵母的形态特和美蓝染色鉴定酵母的死活 实验5-1a：Yeasts(unicellular fungi) Division: budding Do not form filaments Some form filaments Some can mate. 实验5-1:测定微生物的大小  测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺 实验5-1实验程序（测定微生物的大小） 目镜测微尺的校正：在高倍镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10μm，所以可得： 目镜测微尺每格长度（ μm）=（镜台测微尺格数×10）/目镜测微尺格数 注意：校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的接物镜、接目镜、镜筒长度等）进行，而且只能在这特定的情况下才可重复使用。 菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将细菌染色标本置于载物台上，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。 实验5-2:测定微生物数量 实验5-2实验程序 （测定微生物数量） 方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数法——血球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计数板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。 实验程序 Ⅱ1 （测定微生物数量） 1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。 2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。 3. 静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央。 4. 在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。 实 验 程 序Ⅱ2 5. 计算方法： 6. 注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底线和右侧线上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母时，若芽体和母体同等大，就按单个酵母计数。 7. 计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。 实验5-3：美蓝染色死活细胞鉴定 美蓝为无毒染料，其氧化型呈蓝色，还原型无色。 通过美蓝染色，检验细胞的还原能力。活细胞还原能力强，在特定时间内将美蓝还原为无色。 老化、死亡细胞呈蓝色、淡蓝色。 思考题 为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来校正？ 在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？ 实 验 五 结 束 * * 蜉蝣体表面的酵母菌 面包酵母 出芽生殖中的啤酒酵母 （X1+X2+X3+X4+X5） 5 *25（或16）*10 *1000 * 稀释倍数 酵母菌细胞数/mL= * * * *