喜树碱抑制鳞癌细胞增殖、诱导凋亡及其抗血管生成作用的分析.pdfVIP

喜树碱抑制鳞癌细胞增殖、诱导凋亡及其抗血管 生成作用的研究 硕士生姓名：王红梅 指导教师：刘晓明 专业名称：皮肤病与性病学 摘 要 I)的作用，成为一类新型的抗肿 喜树碱因其具有抑制拓扑异构酶I(Topo 瘤药物。最新研究发现喜树碱及其化合物具有抑制细胞增殖、诱导凋亡和促进分 化的作用。血管新生在肿瘤的发生、发展和转移中起重要作用。抗血管生成已成 为肿瘤、银屑病及某些良性增生性疾病治疗的新靶点。有报道喜树碱类药物能抑 制血管内皮细胞的增殖，诱导凋亡，从而阻止新生血管的形成。本研究以喜树碱 增殖及凋亡状况，以研究喜树碱对舌鳞癌细胞及血管内皮细胞的生长抑制和凋亡 诱导作用，探讨喜树碱抗鳞癌的作用及可能机理，并初步探索其抗血管生成机制， 为该药治疗皮肤肿瘤和银屑病奠定实验基础。 浓度。用MTT法检测喜树碱对细胞增殖的抑制及有效浓度范围。通过倒置显微 镜和电子显微镜直接观察细胞形态变化，以检测喜树碱诱导细胞凋亡的情况；用 流式细胞仪分析检测喜树碱对细胞周期的影响和诱导凋亡的作用，用琼脂糖凝胶 电泳法观察细胞凋亡特征DNA梯状带。 最佳抑制浓度为8u u 67．9％、96．7％、97．2％，最佳抑制浓度为O．25 细胞抑制作用在一定的浓度范围内有明显的时间和剂量依赖性。作用于鳞癌细胞 ll 的最佳浓度范围为O．01缸8 g，ml，作用于ECV304细胞的最佳浓度范围为 O．004～O．25 u∥m1，在这一范围内随浓度增加、时间延长细胞存活率降低，超出这 一范围，增加浓度不再提高抑制率。喜树碱对血管内皮细胞的抑制浓度明显低于 凋亡细胞形态学特征。可见细胞核固缩，染色体凝聚，凋亡小体形成等。(3)流 u 式细胞术检测，喜树碱作用于Tca8113细胞48小时，浓度≥l g／ml可引起细胞 凋亡，凋亡比例随浓度的增加而增加，细胞阻滞于S期。作用于ECv304细胞24 小时，浓度≥O．125 u∥m1可引起细胞凋亡，细胞阻滞于G1期。(4)喜树碱分别 作用于ECv304及Tca8113细胞经琼脂糖凝胶电泳检测有凋亡特征性梯状带出现。 结论：(1)喜树碱对舌鳞癌及血管内皮细胞有增殖抑制作用，这种作用具有明 显的时间和浓度依赖性。临床可能对鳞癌有治疗作用。(2)喜树碱可诱导舌鳞癌细 胞凋亡，将细胞阻滞于S期，抑制DNA复制。提示其抗肿瘤机制与诱导凋亡有 关。(3)喜树碱能干扰血管内皮细胞周期，使细胞阻滞于G1期，并诱导凋亡。(4) 喜树碱对舌鳞癌及血管内皮细胞的抑制有一定的浓度范围。最佳抑制浓度分别为 8“咖l和O．25p咖1，再增加浓度不能提高抑制率。(5)喜树碱抑制鳞癌细胞增 殖和诱导凋亡的浓度明显高于抑制血管内皮细胞的浓度。表明喜树碱对肿瘤细胞 群和内皮细胞群均具有抑制作用，为具有双重作用的抗肿瘤药。 关键词：喜树碱 血管新生 凋亡 舌鳞癌细胞 血管内皮细胞 Inhibition on andinduction prOliferatiOn Of in apOptOsis human cancerceUs tongue and antiangiogenic