论文要旨-kufm.kagoshima.PDFVIP

（ 様 式 ３ ） 論 文 要 旨 TRPA1 detects environmental chemicals and induces avoidance behavior and arousal from sleep TRPA1 は環境化学物質を検知し 忌避行動を誘発し、睡眠から覚醒させる 米満 亨 【序論および目的】 外界の危険を察知し、それを回避することは生命維持において最も重要な行動である。イオンチャ ネル・受容体の一つである TRPA1(Transient Receptor Potential Ankyrin 1)は主に感覚神経に存在し、刺 激性の化学物質によって活性化され痛みや行動抑制を引き起こすことが知られている。たとえば、皮 膚に付着したホルマリンによる痛み、気道に侵入したタバコ煙による呼吸抑制、わさびで鼻にツンと くる感覚などにTRPA1 が関与している。 今回我々はホルマリンやワサビを嗅いだ時の鼻にツンとくる感覚は危険を知らせるセンサーとして 機能している、つまり気道や肺など体内深く侵害刺激物質が到達しないよう、気道の入り口である鼻 腔内で早期に検知しているという仮説を立て、野生型マウスと TRPA1 欠損マウスとを用いた比較行動 実験ならびに神経組織化学的検討を行った。 【材料および方法】 １． 野生型マウス(n=6) と週齢の同じ TRPA1 欠損マウス(Jackson Lab から購入、n=6) を用いて、 Place Avoidance/preference Test による比較行動実験を行った。手製の装置を作り、マウスを装置に 十分慣れさせた後、既知の TRPA1 アゴニストであるホルマリンの蒸気で満たした部屋と、コント ロールの部屋への入室回数と滞在時間を５分間測定し、比較検討した。事前に予備実験を行い、 この装置において、それぞれのマウスが各部屋への移動に偏りがないことを確認した。 ２． 実験装置の室内で蒸発させたホルマリン濃度を測定し、ホルマリン蒸気の濃度の違いによっ て野生型マウスの入室回数に違いがあるかを検討した。 ３． TRPA1 の選択的アンタゴニストである AP18 の鼻腔内への局所投与または皮下注射による全 身投与によって、ホルマリン蒸気で充満させた部屋への野生型マウスの忌避行動が抑制されるか を検討した。 ４． 別のTRPA1 アゴニストであるワサビの成分であるAllyl isothiocyanate とタバコ煙に含まれる Acrolein についても、同様の行動実験を行った。 ５． 脳波(EEG) と筋電図(EMG)記録用電極を埋め込んだマウスを作成し、睡眠状態からホルマリン の蒸気吸入による覚醒までの時間を、野生型マウスと TRPA1 欠損マウスで測定し、コントロール 群( 自然覚醒) と比較した。 ６． 神経線維トレーサーであるDiI (Molecular Probe 社) を野生型マウスの鼻腔内に投与し、１週 間後、深麻酔下に灌流固定を行い、三叉神経節を取り出し、抗 TRPA1 抗体で染色し、蛍光顕微鏡 で観察した。 ７． 野生型マウスと TRPA1 欠損マウスをそれぞれホルマリン蒸気に暴露させた群とコントロー ル群に分け、神経細胞活性化のマーカー蛋白質である c-fos の三叉神経脊髄路核における発現量を カウントした。 【結 果】 １． 手製の装置において、野生型マウスはホルマリン蒸気で満たされた部屋には全く入らなかっ たが、TRPA1 欠損マウスは平気で入室した。(P0.01)つまり、TRPA1 欠損マウスはホルマリン蒸 気に対して忌避行動を示さなかった。 ２． ホルマリン蒸気の濃度を下げていくと、野生型マウスのホルマリン蒸気に対する忌避行動が 減弱した。つまり野生型マウスにおける忌避行動はホルマリンの