流感病毒鸡胚培养法 - 福建疾病预防控制中心.pptVIP

流 感 病 毒 鸡 胚 培 养 法 福建省疾病预防控制中心 杨式芹 一、概况 1911年Rous和Murphy首先应用鸡胚培养研究肉瘤病毒(Rous肉瘤)的繁殖。 1938年Goodpasture和Burnet等应用鸡胚繁殖病毒、Cox应用卵黄囊培养立克次氏体。 二、鸡胚的结构与生理 鸡胚是由三个胚层发育起来的，即外胚层，中胚层和内胚层，它们构成胚胎的组织与器官。 （约10日龄鸡胚的结构见图） 三、材料 （一）7~11日龄鸡胚 （二）孵卵箱 （三）检卵灯、开卵钻和卵盘 （四）其它 四、接种技术 （一）活胚检查 1.血管：活胚可见清晰的血管，有时可见血管搏动，死胚血管模糊成淤血带或淤血块。 2.胎动：活胚可见明显的自然运动，尤其在转动胚胎时，死胚见不到任何胎动，胚胎发红像出血样，有的呈现黑块。 3.血管网是否丰满：发育好的鸡胚可见密布丰满的血管网，也就是绒毛尿囊膜，死胚则见不到这一现象。 五、注意事项 鸡胚为一活的有机体，因此要严格无菌操作，同时动作要仔细，以免造成物理死亡。接种后24小时内死亡应不计结果。 * * 鸡胚培养法的优点： 1. 它的组织分化程度低，可选择适当途径接种，病毒易复制，感染病毒的膜和液体含大量病毒。 2. 是个整体，有神经血管的分布及脏器的构造。 3. 来源充足，操作简单，通常是无菌的，对接种的病毒不产生抗体。 鸡胚培养法的缺点： 1. 一般的病毒通常不使鸡胚产生特异性的感染指征。 2. 卵黄中常常含有抗家禽病原体的母体抗体。 3. 某些细菌、衣原体和病毒能够从感染的母鸡传递到鸡胚。 4. 通常鸡胚常常含有白血病病毒。 5. 在鸡食物中加入抗菌素，母鸡吃后会传递给鸡胚，鸡胚就会产生对立克次体和衣原体感染的抵抗。 （二）接种途径 1.尿囊腔接种：该途径一般用于流感、新城鸡瘟病毒和腮腺炎的适应和传代。 2.羊膜腔接种：这途径主要用于临床材料（如患者的鼻洗液及咽漱液）分离病毒。 3.卵黄囊接种：该接种途径主要用于抗流感病毒药物实验。 4.绒毛尿囊膜—壳块培养法：该法可用于流感病毒滴定、中和试验和药物实验。