显微注射外源基因（pIL1-GFP）导入斑马鱼的分析.pdfVIP

朱笠 显微注射外源基因(piLl—GFP)导入斑马鱼的研究 大连水产学院 摘 要 fluorescent 本研究采用显微注射的方法，以绿色荧光蛋白(Green protein， danio reri功受精卵中，研 的重组表达质粒pILl一GFP基因导入斑马鱼(8rachy 究外源导入后的基因整合与表达。利用荧光显微镜分别对各个不同发育时期斑马 鱼胚胎进行跟踪观察，提取导入外源基因斑马鱼的DNA，对其进行PCR检测。试 验结果如下： 小时左右，在外源基因导入约24小时后开始能在荧光显微镜下观察到荧光，囊 胚期发荧光的胚胎比例为27％，随着胚胎发育时间推移，至肌肉效应期后相对 稳定，荧光标记可以检测基因导入的效果。 ％、85％，三次注射后的受精卵质量并无明显差异；仔鱼的孵化率分别为80％、 78％、74％；仔鱼阶段死亡个体较少，自稚鱼开始大量死亡，只有第一组有6 尾长至成鱼，成活率仅为6％，第二、三组外源基因导入实验均未获得成鱼。 (3)提取6尾成活斑马鱼的肌肉总DNA进行PCR检测，结果在6尾成活的 DNA的特异分子带， 导入piLl．GFP基因的斑马鱼中，有2尾可扩增出pILl—GFP 子带，表明在这两尾鱼的体内已经整合了转入的piLl．GFP基因，其基因整合率 为33％。 本研究旨在通过外源基因(pILl一GFP)导入制作转基因斑马鱼的研究，探讨 plLl．GFP基因导入后基因的整合、表达和检测方法，为进一步利用外源基因 据。 斑马鱼 关键词：显微注射；外源基因；piLl．GFP基因： 朱鼗 显微注射外源基圆(piLl-GFP)导入斑马鱼的研究 大连水产学堕 Abstract Green The wasextractedfrom flounder,The Interleukin一1(IL．11 Japan Fluorescent acredible gene．Theforeign Protein(OFP)wasreporter a a anda usedinthis was experimentplasmidcontaining intothe Fluorescent DNAwastransfered gene．Foreign GFP(Green Protein)reporter fertilizedof danio eggs zebrafishrBrachyrerio)via was withfluorescent ofzebrafish observed developingstages embryo microscope．