第九课 胚胎工程.ppt

超低温冷冻保存方法 一步冷冻法省去了洗脱冷冻保护剂，其主要特点是冷冻细管里的冷冻液和稀释液是分开的。细管里装有培养液、含胚胎的冷冻液、稀释液。该法适用于冷冻胚胎运输使用。 快速冷冻法（常规冷冻法）将胚胎或卵母细胞在适当的冷冻保护剂混合液中作短暂处理后，直接投入液氮。 玻璃化法简单、快速而有效，不需要冷冻仪，主要依靠溶液的玻璃化特性，将卵母细胞或胚胎同玻璃化液处理，然后直接投入液氮，解冻时快速进行。 牛胚胎冷冻 家畜胚胎冷冻以牛胚胎最为成功，添加牛血清或牛血清白蛋白的杜氏PBS，一直被广泛用于胚胎保存的基础液 。 采用慢速冷冻、快速冷冻、一步法冷冻、玻璃化法，均可成功。 甘油比DMSO更有利于牛胚胎冷冻。 牛胚胎冷冻已经广泛应用于商业性胚胎移植工作。 1.动物的性别决定 从亚里士多德开始，公元前400多年直到20世纪，发现Y染色体性别决定区基因SRY（sex determining region of Y-chromosome）。 1）雄性异配子型 雄性异配子型，雌性动物只有一种类型的配子，雄性动物则产生两种不同的类型的配子，主要包括XY型和XO型。绝大部分哺乳动物，某些鱼类和两栖类有性生殖、双翅目鞘翅目等昆虫属于XY型。多数直翅目、蜘蛛、多足类昆虫和线虫属于XO型。 七、动物性别控制 2）雌性异配子型 雌性异配子型则正好相反，雄性动物只有一种类型的配子，雌性动物则产生两种不同的类型的配子，主要包括ZO型和ZW型。 3）雄性单倍性型 雄性单倍性型动物没有性染色体，有卵细胞受精与否决定其性别。卵细胞不经受精而直接发育的个体为雄性，卵细胞经受精后发育而成的个体为雌性。蜂类、蚂蚁等属于雄性单倍性型动物。 2. Y染色体性别决定区基因SRY 3. 环境对性别的影响 温度对许多动物的性别发育有着深刻的影响，某些两栖类的性染色体类型为XY，正常发育为雄性个体，和XX型发育为雌性个体。但若水温提高到30℃蝌蚪将全部发育为雄蛙。 鳄鱼没有异型的性染色体，受精卵在30℃以下全部发育为雌性，在34℃以上则全部发育为雄性，而在32℃下则发育的个体中既有雌性也有雄性，雄性比雌性多4倍。 1. X与Y精子的分离 （1）X与Y精子的区别 1）Y精子的F小体 –没有的则是X精子 2）精子的重量– X染色体的DNA含量比Y染色体多，重量和体积也大。由于重量和比重不同，X和Y 精子在液体中运动力、沉降速度等不同。 3）精子运动---Y精子的活动能力比X精子强，运动速度快，在含血清蛋白中呈直线运动。 4）精子的耐酸碱性—Y精子嗜碱性，X精子嗜酸性。 5） Y精子表面的H-Y抗原分布 八、 性别控制的方法与技术 2. 精子的分离方法 1）沉降法—用粘稠度的分离液沉淀分离，上层主要为Y精子，下层主要为X精子。结果不稳定。 2）离心沉降法—X精子的DNA含量高于Y精子，在离心式X精子的沉降速度快于Y精子。 3）电泳法—依据X Y精子表面的膜电荷不同，通过电泳时X Y精子在电场中向不同电极移动，PH7.4时，阳极多为X精子，阴极多为Y精子。 4）免疫学分离法—利用H-Y抗体检测精子质膜上存在的H-Y抗原分离X Y精子。 5） 流式细胞仪分离法 6）化学药品处理法—注入一定的精氨酸1ml，低浓度的母犊多，高浓度的则公犊多。 3. 胚胎的性别鉴定 1）细胞学方法---通过核型分析而对胚胎进行性别鉴定，是经典的胚胎性别鉴定方法。 2）生物化学微量分析法（与X相关酶法）--通过测定与X染色体相关的酶活性，来达到鉴别胚胎性别的目的，早期雌性胚胎的两条X染色体中有一条失活，在胚胎基因组的激活与X染色体失活之间的短暂时期内，雌性两条X染色体都可以转译，雌性胚胎中与X染色体相关酶的浓度及活性是雄性胚胎的两倍。 3）免疫学方法---免疫学方法检测胚胎性别主要是利用H-Y抗体或H-Y mAb检测胚胎是否存在雄性特异性H-Y抗原。 包括：细胞毒性分析法— 间接免疫荧光法--- 囊胚形成抑制法--- 4）分子生物学方法---利用Y染色体上的SRY基因来鉴别胚胎的性别 DNA探针法： PCR扩增法： 5）激素处理 临床应用—避免性别相关联的传染疾病胎儿的产生。 畜牧业生产 1）受性别限制的性状或受性别影响性状方面获益，如母畜产奶，公畜产肉等。 2）消灭不理想的隐性性状，防止性连锁疾病的发生。 3）预测和控制家畜的遗传和表型性别，可增加选育强度。 4） 拯救濒危动物，珍稀动物。 5）提高母畜的繁殖能力。 性别控制的意义 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 2.胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移。你认为这样的概括正确吗？ 答：胚胎移植成功率的高低与供、受体生理环境条