项目青霉素效价的测定 - 天津职业大学.pptVIP

谢谢！ 制药微生物发酵技术 Pharmaceutical microbial fermentation technology —工作过程导向课程 —“教学做”一体模式 生物制药专业 天津职业大学 制药微生物发酵技术----课件 项目1 项目2 项目3 项目4 项目5 制药微生物发酵技术 2-3青霉素发酵工艺过程控制 制药微生物发酵技术 1 青霉素发酵及其效价的测定 告知： 制药微生物发酵技术 ① 掌握灭菌与空气的净化知识。 ② 掌握发酵工艺过程控制知识。 ③ 掌握发酵生产染菌及其防治知识。 ④ 掌握发酵罐及其相关设备操作维护知识。 引入（任务项目） 制药微生物发酵技术 青霉素的生产质量检测方法？ 操练 制药微生物发酵技术 提出一级斜面菌株→ 制备→ 三角瓶液体培养基→ 青霉素标液的配制→ 生测平板→ 效价抑菌圈测定 制药微生物发酵技术 训练项目1 1 青霉素发酵及其效价的测定 1.发酵培养基的配制:按照配方配制液体培养基，250ml三角瓶装液量为100ml。 2.摇瓶培养:从一级斜面菌株接种到三角瓶液体培养基, 25℃、200rpm培养6-7天,可进行青霉素的效价测定 3. 青霉素标准溶液的配制:准确称取纯苄青霉素钠0.06g,溶解在pH 6.0的磷酸缓冲液, 配成100ml 1000单位/ml的青霉素标准工作液.按下表加入青霉素标准溶液 制药微生物发酵技术 训练项目1 1 青霉素发酵及其效价的测定 不同浓度青霉素标品溶液的配制 5 5 500 5 6 4 400 4 7 3 300 3 8 2 200 2 9 1 100 1 pH 6.0磷酸缓冲液(ml) 1000单位/ml青霉素溶液(ml) 青霉素浓度 (单位/ml) 试管号 训练项目1 制药微生物发酵技术 1 青霉素发酵及其效价的测定 4.金黄色葡萄球菌菌悬液的制备 将37℃培养16-18h的斜面菌种,用0.85%的生理盐水洗下,离心沉淀(3000rpm*5min),倾去上清液,沉淀菌体再用生理盐水离心洗涤1-2次 再将其稀释至一定浓度(约109个/ml，或用分光光度计在波长650nm测透光率为20%左右即可)。 5、生测平板的制备 配制生测培养基500ml，灭菌后冷却至50℃，每10ml加入适当稀释的金黄色葡萄球菌0.3ml（15ml），充分混匀；在超净台中倒平板 注意：实验中加菌体的量要控制在使10单位/ml青霉素溶液的抑菌圈直径在20～24mm之间。 训练项目1 制药微生物发酵技术 1 青霉素发酵及其效价的测定 6. 青霉素标准曲线的绘制 生测培养基平板完全凝固后，在每个琼脂平板上轻轻放置牛津杯2个，小杯之间的距离要均匀。然后用移液枪加入不同浓度的青霉素标准溶液，200ul/牛津杯。每个青霉素浓度做3个平行平皿 加入标准青霉素溶液后，将平皿移至37℃培养箱中培养18～24h，移去牛津杯。精确测定抑菌圈的直径大小。 在坐标纸上,以青霉素浓度为纵坐标,以抑菌圈直径的校正值为横坐标，绘制标准曲线 训练项目1 制药微生物发酵技术 1 青霉素发酵及其效价的测定 7. 青霉素发酵液效价的测定 根据发酵时间用1% pH 6.0的磷酸缓冲液将发酵液适当稀释.每个被测样品用3套平皿进行测定.青霉素标准液(1单位/ml)与待测样品的稀释液间隔的加入小管内.37℃培养18-24h后,量取抑菌圈直径的大小 8.青霉素效价的计算: 将青霉素标准液(10单位/ml)的抑菌圈直径进行校正,取得校正值;将此校正值校正待测样品的抑菌圈直径;在标准曲线上根据校正后的抑菌圈直径查得待测稀释液的青霉素效价;根据稀释度得到发酵液的青霉素效价 归纳总结 制药微生物发酵技术 管碟法测量抗生素效价的方法 1.利用抗生素在培养基内的扩散渗透作用，将已知效价的标准品溶液与未知效价的被检品溶液在同样条件下加入已放置在含有高度敏感性的试验菌的培养基上的小管内 2.培养后，在抗生素扩散到达的适当范围内，产生了透明的抑菌圈。不同浓度的抗生素，抑菌圈的大小不同；比较标准品与检品的抑菌圈大小，利用不同的计算原理，就可以推算出此抗菌素的效价 应知应会 制药微生物发酵技术 效价 titer 作业 : 制药微生物发酵技术 不同浓度青霉素标品的抑菌圈直径 20 19.2 18.8 17.8 16.3 15.2 每组抑菌圈平均直径（毫米） 600 500 400 300 200 100 青霉素浓度（单位每毫升） 谢谢各位专家！ 恳请指导 谢谢！