海藻糖合成酶基因克隆及其转化草莓的分析.pdfVIP

摘 要 干旱是影响植物生长发育和限制农作物产量提高的主要环境因子。利用传统的方法 至今尚未培养出真正的耐旱、耐盐品种。植物耐旱分子机制的研究和生物技术的日臻完 善，为培育高效耐旱植物迎来了曙光。 海藻糖是由两个葡萄糖分子以a、a1—1糖苷键结合的非还原性双糖，对许多生物 的抗逆耐受性起着重要作用。酵母细胞中的海藻糖由珊，，7艘、TPS3和TSLl四个 基因负责合成，其编码的多肽组成一个海藻糖合酶复合体。砰彤基因编码UDP．葡萄糖 依赖性的海藻糖．6．磷酸合酶，纪舵基因编码海藻糖．6．磷酸酯酶，扭邸和戒』两个基 因的产物可能对复合体起稳定和调节作用。实验证实嬲，基因就可以使生物体获得产 生海藻糖的能力，酵母的海藻糖合成酶复合体中6．磷酸．海藻糖的脱磷酸化作用是非特 异性的，它可由生物体内的其它酯酶所代替。 提取酿酒酵母的总DNA，以此为模板，采用PCR的方法从酿酒酵母中克隆出了 l a中，通过蓝白斑筛选重 和Smal双酶切的pUCll8载体质粒连接，转入大肠杆菌DH5 组子。经过酶切和PCR鉴定表明『PS』基因克隆进载体中。将克隆出的序列进行了测序。 通过同样方法将该片段连接到pBll2l载体上，转化海藻糖合成酶基因缺失的大肠 FF4169：MC4100 杆菌(菌侏号FF4169， 菌株)。生长曲线表明，带有克隆片段的转化株在0．5mo儿NaCI的高渗透压培养基中生 长良好，而作为对照的缺失株则几乎不能生长。这表明克隆所得到的片段具有海藻糖合 成酶活性。 体，经茵落原位杂交鉴定，证明豫酣基因已经转入农杆菌中。 采用叶盘法利用转化了的农杆菌对草莓进行侵染，用无菌滤纸吸干叶片上多余菌 Kan和200 液，在培养基上共培养三天，共培养后的叶片在附加40mg／L mg几Cef的再 生培养基上选择培养，筛选出的不定芽在附加25 mg几Karl的草莓继代培养基上继续筛 选培养并增殖，增殖后的草莓植株转入附加25 fTl呈儿Kan的生根培养基上生根，提取生 根后抗性檀株的DNA，经过PCR和点杂交鉴定，证实所获得植株为转化植株。 关 键 词：海藻糖：TPsI基因；克隆：转基因草莓 Abstract thatinfluenceson and factor environmental isthe adverse growth Droughtmajor plant With of decreases the significantly development development，andcropsproductivity molecular findanotherofcultivarnewbreeds． way biology,people non-deoxidize asa of and Trehalose，a disaccharide，serves enz