特发性无精、少精症DAZ基因分析及其临床应用的分析.pdfVIP

中文摘要 特发性无精、少精症 DAZ基因分析及其临床应用的研究 摘 要 目的：特发性无精症、少精症约占男性不育的11％， 为了解无精症、少精症带给不孕夫妇的痛苦，人们正致力 于揭示生精机制、阐明生精障碍的病理生理等方面的研 究。近年来分子生物学和细胞遗传学的研究表明，精子发 生是由相关基因调控的。人类Yqll，23上存在着与精子发 factor, 生相关的多基因家族一无精子因子(azoospermia AZF)，其中的多个基因缺失可以导致严重生精障碍。DAZ 基因被认为是AZF的最重要候选成分，它的缺失可以引 起不同程度的生精障碍：从无精子症到少精子症。本研究 旨在探讨DAZ基因在精子发生过程中的重要作用和DAZ 基因与特发性无精症、少精症的关系。 方法：共收集了27例无精症患者(后经染色体检查证 实有6例核型异常，其中3例为Klinefelter’s综合征)、13 例特发性少精患者和40例正常生育力男性外周血标本。 无精症是根据WHO标准，连续检测离心后精液三次以上 未发现精子，少精症精子数均小于1000万／ml。每例标本 采用常规酚一氯仿抽提法提取外周血基因组DNA；然后 以位于DAZ基因中的SY277为引物，用聚合酶链反应 (PCR)扩增基因组DNA中的DAZ基因，紫外灯下观察结 果，扩增片断长275bp，结果连续三次阴性者为DAZ基 因缺失。阴性结果通过多重PCR再次得以验证，多重PCR 中文摘要 反应体系中加入了SY277、SYl4两对引物，sYl4作为内 对照，同时扩增两个基因，紫外灯下有两条扩增带，分别 位于275bp和472bp处。这样任何影响PCR反应的因素 将同时影响两个基因的扩增，可排除模板DNA、反应体 系、加样误差等的影响，使结果更为可信。实验结果用四 格表的确切概率法进行统计学分析。 结果：PCR结果共检测出3例DAZ基因缺失，均为 核型正常的特发性无精患者，约占特发性无精患者的 14．3％(3／21)，符合文献报道的5～16％。40例正常生育力 男性中未发现有DAZ基因缺失，缺失率为0。统计学分 析P0．05，DAZ基因在特发性无精症和正常男性中缺失 率具有统计学意义，说明DAZ基因的缺失可以导致特发 性无精症，是引起无精症的重要原因，DAZ基因可能参 与了生精过程。而且我们的3例阴性结果患者有一人作了 睾丸穿刺活检，病理结果是生精障碍伴生精细胞缺如，符 合DAZ基因缺失引起的睾丸组织学变化，更加充分的表 明DAZ基因与睾丸生精功能的密切关系，其缺失可引起 生精障碍。文献报道特发性少精症中有DAZ基因缺失， 但都发生在严重少精症中，缺失率在6～14．3％不等。我们 13例少精症中仅有3例严重少精，没有检测到DAZ基因 缺失，说明DAZ基因可能在轻、中度少精中无缺失，DAZ 基因缺失将引起严重生精障碍。Tateno．T的研究表明， Kelinefelter’s综合征患者的严重生精损害，不是由Y口的 微缺失引起，而是由不同机制和多重因素影响的结果。我 因缺失，缺失率是0，虽然病例数目很少，不能单独说明 中文摘要 问题，但也间接的支持了Tateno．T的结论。 结论：本研究采用聚合酶链方法(PCR)检测了特发性 无精患者的DAZ基因，结果DAZ基因在特发性无精症中 频繁缺失，而正常生育力男性中无缺失，揭示了DAZ基 因与特发性无精症的密切关系，说明DAZ基因可能在生 精过程中发挥重要作用，它的存在是精子生成的一个重要 条件，DAZ基因缺失可以引起特发性无精症，是男性不 育的原因之一。对于原因不明的无精症，我们可以对其进 行DAZ基因的检测，帮助其明确病因，以避免盲目的求 治，造成患者经济上的损失和精神上的伤害。ICSI技术的 诞生，给无精症患者重新点燃了希望，成为无精症患者的 首选治疗方法。ICSI是将精子注入卵细胞浆内，使精卵结 合，产生受精卵，但ICSI除了能使正常的精子与卵细胞 受精，还可以将具有染色体异常、缺失、基因突变的精子 注入卵细胞浆内，产生受精卵，将遗传缺陷传递给下一代。 由于DAZ基因位于Y染色体长臂，其遗传有性别选