皮肌炎与四种人类疱疹病毒相关性的分析.pdfVIP

巾文摘要 耳 的 肌肉及外周血中人类疱疹病毒1型(又称单纯疱疹瘸毒一l，her- pes simplex-drus virus，EBV)、5型(人类巨缏胞病毒hu— (EB病毒，Eptein—Barr mall 这疆墅人类瘛疹病毒(huraan herpesvhus，HHV)乏阕瓣挺关性。 方 法 一、实验槠辩 1、痣铡资辩 1 皮肌炎患者的32份外观设常皮肤、29份肌肉及3l份外周血 拣本取鑫鸵钢经l鞋床、病理、飘篷图帮斑清虢酶梭查确诊静病饲， 所肖病例均来自中圉医科大学附属第一医院及沈阳市第七人民医 院皮肤科。 2、对照资料 (1)正常对照：援常皮肤36份、正常肌肉26份及健康献血员 羚惩盎锸镑； 终海EBV的辩性霹照。 (3)阴性对照：在PCR反应体系中以灭菌双蒸水代替DNA 模摄透符扩增反应。 二、实验方法 1、DNA的提取 采用酪一氯仿法提取皮获、虢岗及外周盥自细胞审DNA，并 以紫外分光光度计测定浓度及纯度后，于-20。C保存待用。 2、PCR技术 所提取熬DNA均泼蠹对照弓|物PC03／PC04送行聚合酶链反 chain reaction，PCR)扩增人p一球蛋白基因，产物 应(polymerase 片段长度110bp，阳镶标本入选本实验。用HSVl、HSV2、EBV、 HCMV的通用弓l物P一1／P一2以PCR技术检测上述病毒的DNA 反疲居，对其产物进符璩脂糖凝黢毫泳，并霉壹接将扩增为5s9bp 的HCMV分辨开来。 3、限制性核酸内切酶酶切鍪定 以通用引物P一1／P一2扩增的产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定 为阳性片段者(520bp左右)利用DNA片段回收试剂盒阐收，褥以 l秘Sma 限制性恣仞酶BamH l对霾毅芹段进行酶留反应，其产物 以8％聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gelelectrophoresis， PAGE)鉴定，从而区分HSVl、HSV2及EBV。 结 果 一 f一、PCR结果 段。 2、阳性对照：以通用引物P一1／P一2扩增从HSVl感染细胞 秘BC一1缨稳孛提取的DNA，均毒现长瘦约为520bp的蠢的片 段。 3、阴性对照：均元扩增条带出现。 。2。 4、皮腿炎组：32份钋观纛常皮肤中餐5份、29份肌魄中有6 份、31份外周血中有5份扩增出长度约520bp的目的片段产物； 5、正常对照：36份正常皮肤、26份正常肌隗及46份健康献盘 员外周血中末见到500bp-600bp之间的目的片段。 二、PCR产物的酶切分析结果： 皮肌炎患者的标本中5份外观正常皮肤、6鼍l}肌肉及4份外 I I和Sma 周血中检出的520bp左右的产物回收后分别被BamI-I 对照一致，证实为EBVDNA来源；另外从1份外周血中检出的 520bp左右的产物回收后能被Sma I切成476bp和42bp，但不能 被BamH I切断，与预期结果及HSVl器黢对照一致，证实力HSVl DNA来源。EBV在皮肌炎患者外观正常皮肤、肌肉及外周血中无 懑对阳性者，组在1例皮觏炎合并类风湿关节炎患者的外观正常 皮肤及肌肉中同时阳性。在所有标本中均无EBV与HSVl同时 阳性者，并且均耒梭出HSV2及HCMVDNA。 经x2检验，皮肌炎患者外观正常皮肤与正常