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皮质酮诱导Leydig细胞凋亡机制的研究 中文摘要 皮质酮诱导Leydig细胞凋亡机制的研究 中文摘要 超生理剂量的糖皮质激素(大鼠体内为皮质酮)能诱导Leydig细胞凋亡。但 有关皮质酮诱导Leydig细胞凋亡的细胞内机制尚不清楚。本研究旨在观察皮质酮 体及神经酰胺是否涉及这一过程也作一初步评价。首先采用Annexin—V-FITC及 PI双标记并经流式细胞仪分析和DNA的琼脂糖电泳两种方法，分别观察经皮质酮 处理不同时间组大鼠Leydig细胞的凋亡率及其基因组DNA的电泳图谱。流式细胞 h、48 仪分析及BNA电泳显示：经皮质酮处理12h、24h后，Leydig细胞凋亡率与 对照相比有显著差异且其基因组DNA的电泳图谱呈现梯状条带。在明确超生理剂 量的皮质酮确能诱导大鼠Leydig细胞凋亡的基础上，我们进行有关皮质酮诱导 Blot和免疫荧光染色的方法， Leydig细胞凋亡机制的研究。分别采用Western 检测在不同时间点上经皮质酮处理大鼠Leydig细胞中Fas、FasL蛋白表达情况； 况。采用caspase一3的酶荧光发光测定法，检测经皮质酮处理大鼠Leydig细胞中 膜电位及活性氧水平；采用Western Blot的方法，检测经皮质酮处理大鼠Leydig 细胞中Bcl一2蛋白表达情况；采用薄层层析结合放射自显影方法，检测不同时间 Blot和免疫荧光染色显示出一致的结 点上geydig细胞中神经酰胺水平。Western 果：Fas蛋白表达水平在皮质酮处理6h时开始上升，24h时最为显著；FasL也出现 上述类似结果，即蛋白表达水平在皮质酮处理6h时开始上升，24h时最为显著。 量下降，而具有生物活性的裂解的caspase一3蛋白于12h时出现，24h表达水平最 为显著；CaSpase一3酶活性在皮质酮处理12h时与对照相比亦有差异，以24h时最 l 皮质酮诱导Leydig细胞凋亡机制的研究 中文摘要 位在皮质酮处理3h时即开始降低，线粒体内ROS水平在皮质酮处理6h时开始增加。 经皮质酮处理的各实验组及对照组其Leydig细胞中均无Bcl-2蛋白的表达。神经 酰胺水平在皮质酮处理1h时即开始上升，2h时最为显著。本研究结果提示：皮质 过程，其中还可能有线粒体及第二信使神经酰胺的参与，]丽Bcl-2蛋白不涉及该 凋亡过程。 关键词： 凋亡 Fas FasL 皮质酮Leydigiltt胞 caspase一3 线粒体 Bcl-2 神经酰胺 皮质酮诱导Leydig细胞凋亡机制的研究 英文摘要 The ofMechanismon of PrimaryStudy Apoptosis Leydig CellInduced COrticOsterOne by ABSTRACT The levelsof are achieved high corticosterone(CORT