“自杀基因”的肿瘤细胞.PPT

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 耐药基因治疗： 肿瘤细胞耐药性与多种糖蛋白或酶： 多药耐药（mdr-1）基因编码的P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白（MRP）以及肺耐药相关蛋白等； 细胞内氧化和解毒作用的酶系统： 细胞色素P-450（cytochrome P-450）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）等。 向肿瘤患者的骨髓细胞导入某种耐药基因，增强骨髓细胞的抗药性，以便耐受大剂量的化疗药物，达到彻底杀灭肿瘤细胞的目的。 （三）病毒性疾病的基因治疗研究 据统计，75%的人类传染病是由病毒引起的。病毒感染人体后不仅可能急性发病，还可以在人体内长期潜伏，造成终身伤害。病毒还是造成先天畸形的重要因素之一。它与某些癌症、自身免疫性疾病和内分泌疾病也存在一定的关联。 临床上对绝大多数病毒感染性疾病仍然缺乏有效的治疗手段，在众多开展的抗病毒治疗方案中，抗病毒基因治疗十分引人注目。 1．调节机体免疫应答 （1）将细胞因子(如干扰素、白细胞介素等)的基因，导入机体免疫细胞，激活免疫细胞并促进其增殖分化，增强机体的细胞和体液免疫应答，促进机体清除病毒感染的细胞和游离病毒。 （2）将能够诱导机体产生保护性免疫应答的病毒抗原基因，如乙型肝炎病毒表面抗原基因等，导入机体，表达的抗原不仅可以诱导机体产生保护性抗体，还可以引发特异性的细胞免疫应答，产生对野生型致病病毒攻击的防御作用。 2.抗病毒复制：根据病毒在机体细胞中复制周期的各个环节来设计的 （1）抑制病毒与宿主细胞结合：即阻断病毒表面抗原决定簇与宿主细胞受体间的特异性结合。 （2）干扰病毒基因组的转录起始和调控。 （3）抑制病毒基因组的复制和蛋白质合成。 （4）RNA干扰技术。 （5）将抗病毒蛋白质基因，如2→5腺苷酸合成酶等基因，导入细胞并持续表达，可以激活核酸酶F，降解病毒RNA。 主要包括： 五、基因治疗的问题与展望 治疗基因调控元件的选择 安全高效载体的构建和转移技术的选择 靶细胞的选择 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * AAV载体的缺陷 AAV载体容量小，目前最多只能容纳5 kb外源DNA片段； 感染效率比反转录病毒载体低, 在40%~80%的成人中存在过感染; 可能会引起免疫排斥。 常用基因治疗载体 ? 整合 致病性 感染细胞 克隆容量 反转录病毒 载体 随机整合，效率高 可能致病 分裂细胞 7kb 腺病毒载体 不整合，可能丢失 不致病 分裂细胞、非分裂细胞 ? 腺相关病毒载体 定点整合(19号染色体特定区域) 不致病 分裂细胞、非分裂细胞 5kb 7.5kb 2.非病毒载体介导的基因转移系统 （1）脂质体介导的基因转移技术 脂质体介导的基因转移技术使用方便、成本低廉。 基本原理:利用阳离子脂质体单体与DNA混合后，可以自动形成包埋外源DNA的脂质体，然后与细胞一起孵育，即可通过细胞内吞作用将外源DNA（即目的基因）转移至细胞内，并进行表达。 脂质体介导的基因转移示意图 目 录 （2）受体介导转移技术 将DNA与细胞或组织亲和性的配体偶联，可使DNA具有靶向性。这种偶联通常通过多聚阳离子（如多聚赖氨酸）来实现。多聚阳离子与配体共价连接后，又通过电荷相互作用与带负电荷的DNA结合，将DNA包围，只留下配体暴露于表面。这样形成的复合物可被带有特异性受体的靶细胞吞饮，从而将外源DNA导入靶细胞。 受体介导转移技术示意图 目 录 （3）基因直接注射技术 不需要进行基因工程的繁琐操作，直接将裸露DNA注入动物肌肉或某些器官组织内。 动物实验表明：接受注射外源DNA的小鼠能够按其基因编码合成相应的蛋白质，并能维持数月之久。 将促进心脏血管生长的基因直接注入实验鼠的心脏，可使其心脏壁内毛细血管增加30%～40%； 将胰岛素基因直接注入鼠骨骼肌细胞，能分泌糖尿病所缺少的胰岛素； 肌内注射凝血因子Ⅸ基因，可产生血友病所需的凝血因子Ⅸ 。 基因直接注射法的优点 制备具有调控部件的质粒DNA重组体的技术较容易； 排除病毒载体可能