南海深海微生物酯酶EST12-7在制备（R）-2- 氯丙酸乙酯中的应用研究.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１６，３６（１２）：５９６５ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 南海深海微生物酯酶ＥＳＴ１２７在制备（Ｒ）２ 氯丙酸乙酯中的应用研究 １，２ １，２ ４ １，２ １，２ １，２，３ 曹莹莹 　邓　盾 　夏方亮 　孙爱君 　张　云 　胡云峰 （１中国科学院南海海洋研究所　中国科学院热带海洋生物资源与生态重点实验室　广州　５１０３０１） （２中国科学院南海海洋研究所　广东省海洋药物重点实验室　广州　５１０３０１） （３南海生物资源开发和利用协同创新中心　广州　５１０２７５　４滨州市食品药品检验检测中心　滨州　２５６６１８） 摘要　利用来源南海深海的微生物酯酶ＥＳＴ１２７不对称水解反应拆分制备（Ｒ）２氯丙酸乙酯。 并探寻了温度、ｐＨ、底物浓度、有机溶剂和反应时间等因素对酯酶ＥＳＴ１２７催化制备（Ｒ）２氯丙 酸乙酯的影响。结果表明，深海微生物酯酶ＥＳＴ１２７催化制备（Ｒ）２氯丙酸乙酯的最佳反应条件 为：１３．８ ｇ／ｍｌ酯酶ＥＳＴ１２７，５０ｍｍｏｌ／Ｌ（±）２氯丙酸乙酯，２％正癸醇，ｐＨ８．５，３０℃，０．０５ｍｏｌ／Ｌ μ ＴｒｉｓＨＣｌ，反应６０ｍｉｎ。在最佳反应条件下，（±）２氯丙酸乙酯的转化率可达４９％，所制备的 （Ｒ）２氯丙酸乙酯的光学纯度为９８％。通过对酯酶ＥＳＴ１２７拆分制备（Ｒ）２氯丙酸甲酯和（Ｒ） ２氯丙酸乙酯进行比较，２氯丙酸酯中的链长对酯酶ＥＳＴ１２７拆分反应有极大的影响。 关键词　深海微生物　酯酶　（Ｒ）２氯丙酸乙酯　高光学选择性 中图分类号　Ｑ８１９ 　　随着科学技术的发展，化工产品在农业方面的应 而且使用化学拆分法所制备的手性产物的光学纯度较 用逐渐增多。农药是继化肥之后应用于农业生产的最 差。相比较，以酯酶和脂肪酶为代表的生物催化剂可 重要化工产品，在化学防治作物病虫害方面起着重要 以高效地通过转酯和水解等反应拆分制备手性酸、手 ［７８］ 作用。其中除草剂已成为现代农业生产中不可缺少的 性醇以及其相应的手性酯类化工产品 。通常酶促 化工产品。 拆分反应所制备的手性化工产品的光学纯度很高，反 　　手性２氯丙酸酯是制备光学纯的芳氧基丙酸类除 应的产率也较高，为手性化工产品的产业化生产提供 ［９］ 草剂／植物生长调解剂以及手性非甾体类消炎解热镇 了很好的制备方法 。此外，酶促拆分反应是绿色的 ［１］ 生产过程，生产过程对环境污染小，符合提倡的环保 痛药的重要中间体 。消旋的２氯丙酸酯作为中间体 被用于合成医药或农药，但由于消旋中间体中含有低 理念。 效、无效甚至有毒副作用的光学异构体，不仅会降低药 　　手性２氯丙酸甲酯和手性２氯丙酸乙酯同为重要 ［２］ ［１０］ 效带来毒性，而且会造成原料的巨大浪费 。近年来， 的２氯丙酸酯化工产品 。由于分子中存在酯键，可 拆分技术已经成为手性酸和其酯的重要制备方法，相 以使用酯酶或脂肪酶生物催化剂，通过不对称水解相 应的拆分技术主要包括化学拆分法、生物酶拆分法、色 应的酯键，从而高效制备高附加值的手性２氯丙酸甲