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实时定量总结209
实时定量PCR 卢珈，张凯华 目录 简要介绍 大致过程 结果展示 经验与反思 简要介绍 实时定量PCR的目的是分析某种基因在组织或细胞中的表达量，而非扩增基因 原理： 大致过程（具体见word） 提RNA(RNA易分解) 反转录：RNA cDNA（能长期保存） 实时定量PCR 结果展示 结果展示 结果展示 见表格 经验与反思 整个实验对精确度要求很高，加样枪的使用会极大地影响实验结果。采取先总配后分装的方法可以减少误差。 建议采取的分装方法：先将同种引物下，除了模板以外的所有的试剂进行总配，再按照模板数分装，再加入模板，每次加样都尽量在5微升以上，此时加样枪的准确度较好。注意加样枪的规范使用。 经验与反思 稀释方法（见word总结） 经验和反思 对于总结出来的经验有很多，但是这些经验只有在做过实验之后才有体会才能在之后的实验中更加注意。 我在做实验时犯的错误有一部分其实之前是在之前的PPT里提到过的，但是不亲自动手，不熟悉整个流程，就不能真正理解别人的经验和反思。 经验与反思 做实验前要熟悉整个流程，要提前准备好器材，每做一步要知道后一步或两步的内容。 熟悉流程也有利于当实验出现问题时及时找到问题所在。 经验与反思 实验后要及时总结和反思，记录不足的地方。 可以多看看论坛上别人的攻略或经验，别人犯的错误也是有可能出现在自己身上。包括各种低级错误，如忘记离心混匀，时间设置错误，样本引物试剂拿出来后未及时放置于冰上。 * Cycle（循环数） Rn（荧光强度） Baseline Lg－liner phase 平台期 *
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