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多色免疫荧光标记多色免疫荧光标记 Company Confidential 流式细胞仪的发展历史 年,第第一个报道自动计数细胞的是个报道自动计数细胞的是MMoldldavan, 他描述了他描述了一个装个装 置：在显微镜的载物台上，悬浮的血红细胞从一个毛细玻璃管中流 过，每个通过的细胞可被一个光电装置记录下来。这个实验被看成 是有关流式细胞术的第是有关流式细胞术的第一个尝试个尝试。 1949年，Wallance Coulter ，也就是库尔特公司的创始人，发明了 流动的悬浮粒子计数方法流动的悬浮粒子计数方法。 1965年，Kamentsky第一次用核酸的紫外吸收和可见光散射两个参 数同时测量未染色的细胞数同时测量未染色的细胞。。并且第并且第一次用两维直方图分析数据次用两维直方图分析数据。。第第 一次用计算机接口到仪器上，记录并分析多参数数据 Company Confidential • 1972年，Herzenberg研制出细胞分选器的改进型，能够检测出经过荧光标 记抗体染色的细胞较弱的荧光信号记抗体染色的细胞较弱的荧光信号 . • 美国BeckmanCoulter公司1975年研制出第一台带计算机的流式 , 此后的 30年里,先后研制生产出 (1) 临床型流式EPICS II （1984年）、PROFILE II （1986年）单激光激 发双色; (2)(2) 第第一台空冷激光带石英流动室的流式台空冷激光带石英流动室的流式EPICSEPICS ELITE(1989)ELITE(1989) 单激光三单激光三 色带分选的流式 (3)EPICS XL/MCL(1993,1998)单激光同时检测三色/ 四色标记, (4)EPICS ALTRA(2000)同时检测六色/八色标记,带分选,可以安装4根激 光 (5)FC500(2002)(5)FC500(2002) /FC600(2004)/FC600(2004)单激光同时检测五单激光同时检测五//六色荧光六色荧光,可以安装可以安装22 根激光 (6)NEXTGEN(2004)同时检测13种颜色, 可以安装3根激光 Company Confidential EPICSEPICS XLXL临床科研型流式细胞仪临床科研型流式细胞仪 Company Confidential CytomCytom icsics ™ FC500FC500 FlowFlow CytomCytom etereter Company Confidential EPICS ALTRA 流式细胞分析仪 Company Confidential NEXTGENNEXTGEN Company Confidential 为什么要多色分析为什么要多色分析? • 以做CD3,CD4,CD8为例: 单色分析:3种互相孤立的结果 Company Confidential n • 多色分析:2 个结果, 具有关联性 Company Confidential 生物学物学 • 我们想做什么我们想做什么? • 细胞群 – 淋巴细胞, 单核细胞,粒细胞, 血小 板, etc. • 抗原组合 • 多少? • 共表达? • 表达密度? • 抗原分布抗原分布