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博士(地球环境科学)望月麻友美学位论文题名(
博士 (地球環境科学)望月麻友美
, 学位論文題名
,Peptide―conjugatedChitosanMembranesAsExtracellular
●
MatrixMimetics;NewBiomaterialsForTissueEngineerlng
(ベプチドーキトサン膜を用いた人工基底膜の創製に関する研究)
学位論文 内容の要旨
エネルギー ・資源の枯渇、地球環境の汚染に関する問題が広く論じられる中、我が
国では2000年に 「循環型社会基本法」が施行された。環境への負担を減 らし次世
代に持続可能な社会を実現するためには、単に廃棄物対応の循環ではなく、自然やエ
ネルギーなどすべての資源が効率的に循環できる循環型社会の構築が必須である。リ
デュース ・リユース ・リサイクルが機能することによって、経済社会の中での資源の
循環を実現することができ、それと同時に自然の循環を尊重することができると考え
られる。
キチン、キトサンは,カニ,エビなどの甲殻類の殻をはじめとして昆虫の表皮,軟
体動物の骨格や殻,キノコ,病原菌など細菌細胞壁に広く分布している。地球上で毎
年推定一千億 トンも生合成され,同時に生分解されている。この生合成と生分解の循
環が地球の環境と生態系を保全していた。長年の問、食された後に残される大量のカ
ニ殻は廃棄処分されているのが現状で、循環のバランスが保てなくなっている。そこ
で水産加工場から廃棄されるカニ殻キチンを原料にキトサンの工業生産が始まった。
キ トサンは、反応可能な一級アミノ基を有するため、化学修飾が比較的容易であり、
様々な機能を付加することが可能である。これまでに食品 ・工業 ・農業分野、医用材
料分野、成型品分野などで数々の応用が進展した。しかし未だにそのほとんどが生ゴ
ミ・産業廃棄物として処理されている状況である。
本申請者は天然産業廃棄物キトサンを有効利用することに強い関心を抱き、有効利
用の手段として医用材料へ応用することを目的として研究を行ってきた。キトサンは、
免疫原性が低く、生分解性であるので、これらの特性を保ったまま組織と強い親和性
を持つ柔軟な膜や線維として形成し医用材料として実用化されている。またキトサン
は、コラーゲンやフィブリンなどの脊椎動物由来の生体高分子と比べて、人畜共通感
染症等の危険性がはるかに低く、医用材料などの用途で人に用いるのに適していると
考えられる。近年、医用材料の分野では基底膜などの細胞外マトリックスが生体内で
担 う役割の重要性が認識されつっあり、その機能を模倣した医用材料の研究が報告さ
れはじめた。特に、発生段階や組織再生時における基底膜構成タンパク・ラミニンの
機能に注目が集まっている。本申請者は、キトサンに化学的に生物活性 (ラミニン由
来活性ペプチド)を固定化することで、生体内の組織の再生、維持に重要な役割を果
たす基底膜の活性を模倣した人工基底膜の創製を試みた。
第一章では、ペプチド―キトサン膜を開発し、膜の活性を検討した。キトサンに二価
官能性試薬のN- (マレイミドベンゾイルオキシ)ースクシイミド(MBS)を導入しMB―キト
サンを調製 した。キ トサンに固定化させる生物活性 として基底膜の主要構成成分であ
るラミニンの細胞接着部位 (生物活性ペプチド)の中で、細胞接着活性が強い部位、
インテグリンやシンデカンといった細胞膜上の受容体 (レセプター)が同定されてい
203-
る部位を用いた。ペプチ ドのN末端にシステインを付加し、システインのSH基を介して
キトサン膜のMB基と共有結合させペプチドーキトサン膜を調製する方法を開発した。こ
の方法によって得られたペプチド―キトサン膜に由来の異なる様々な株化細胞を加えて
無血清状態で2時間培養し細胞接着活性を測定すると、活性ペプチドを固定化したキ
トサン膜は明瞭な細胞接着活性を獲得することがわかった。接着する細胞数は、キト
サン膜に固定化したペプチ ド量に依存すること、また、培養皿にベプチドを直接コー
トする方法よりも、キ 卜サン膜に化学的に結合させる方が、用いたぺプチ ドの質量あ
たり
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