葡萄籽蛋白质的分离纯化及电泳分析 - 江苏农业科学.pdf

— ３１８— 江苏农业科学　２０１６年第４４卷第４期 任继波，李敬龙，胡文效．葡萄籽蛋白质的分离纯化及电泳分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０１６，４４（４）：３１８－３２１． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１６．０４．０９１ 葡萄籽蛋白质的分离纯化及电泳分析 １ １ ２ 任继波 ，李敬龙 ，胡文效 （１．齐鲁工业大学生物工程学院，山东济南２５０３５３；２．山东省葡萄研究院，山东济南２５０１００） 　　摘要：以脱脂脱酚葡萄籽粕为原料，采用碱液浸提法对籽粕中蛋白质进行提取，确定蛋白质的最佳提取条件为温 度８８℃、浸提液ｐＨ值１１．５、料液比１ｇ∶２５ｍＬ、提取时间１３０ｍｉｎ，该条件下蛋白提取率达到８３．５％。结合蛋白提取 液性质，设计了一套可行的葡萄籽蛋白质纯化方案，初步确定了纯化方案中几个关键点的工艺参数。利用 ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ电泳对纯化前后的样品蛋白进行检测分析，发现样品蛋白中主要存在４种蛋白亚基，分子量分别为４０、３７、１９、 １７ｋｕ，纯化后４种蛋白亚基占总蛋白的相对含量为９１．５％。 　　关键词：脱脂脱酚葡萄籽粕；提取；纯化；电泳分析 　　中图分类号：ＴＳ２５５．１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１６）０４－０３１８－０３ 　　我国作为世界第７大葡萄酒生产国，２０１３年葡萄酒产量 １．２　方法 达１１．７亿 Ｌ，葡萄酒生产过程中产生的葡萄籽约５万 ｔ。葡 ［４］ １．２．１　测定方法　籽粕含水量测定：水分测定常规法 ；籽 萄籽是一种资源性副产物，含有丰富的脂肪、蛋白质、碳水化 ［５］ 粕粗蛋白测定：凯氏定氮法 ；提取液蛋白测定：考马斯亮蓝 ［１］ ［２］ ［６］ ［７］ 合物及其他活性成分 ，其中关于葡萄籽油 、葡萄籽原花 比色法、双缩脲法 ；蛋白质等电点测定：等电点比色法 ； ［３］ 青素 利用的研究较为常见，而葡萄籽蛋白质的利用研究却 蛋白质分子量测定：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳。 鲜有报道。脱脂脱酚葡萄籽粕中粗蛋白含量为１１％～１３％。 １．２．２　脱脂脱酚葡萄籽粕蛋白质等电点的测定　取等量的 检测发现，小芒森（ＰｅｔｉｔＭａｎｓｅｎｇ）葡萄籽蛋白质含有 １８种氨 蛋白质提取液，用２ｍｏｌ／ＬＨＣｌ将 ｐＨ值分别调为４．６、４．４、 基酸，包括８种人体必需氨基酸，且天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸 ４．２、４．０、３．８、３．６、３．４、３．２、３．０、２．８、２．６、２．４、２．２，离心，测 含量较高，植物中普遍缺乏的赖氨酸、精氨酸较为丰富，因此 上清液中蛋白质浓度。以ｐＨ值为横坐标，上清液蛋白浓度 葡萄籽蛋白质在食品、饲料等领域具有较高的应用价值。本 为纵坐标作图，得到上清液蛋白浓度随ｐＨ值变化的曲线图。 研究对葡萄籽中的蛋白质进行了提取与分离纯化，并测定了 １．２．３　脱脂脱酚葡萄籽粕蛋白质的提取 蛋白亚基成分，旨在为葡萄籽的综合利用提供参考。 １．２．３．１　蛋白提取工艺流程　脱脂脱酚葡萄籽蛋白质的提 取工艺流程见图１。 １　材料与方法 １．１　材料与仪器 脱脂脱酚葡萄籽粕（粗蛋白含量１１．６％），葡萄品种小芒 森，产地山东省蓬莱市；有关有机、无机试剂药品均为分析纯。 ＵＶ－５２００型紫外可见分光光度计，上海元析仪器有限 公司；Ｋｊｅｌｔｅｃ２３００型凯氏定氮仪，丹麦福斯分析仪器公司； ＤＹＹ－６Ｃ型电泳仪电源、ＤＹＣＺ－２８Ａ型电泳仪，北京市六一 仪器厂；ＣｈａｍｐＧｅｌ