海洋来源琼胶酶的分离纯化及酶学性质研究.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１７，３７（１）：４６５２ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 海洋来源琼胶酶的分离纯化及酶学性质研究  谢喜珍　林　娟 　谢　勇　叶秀云 （福州大学 福建省海洋酶工程重点实验室　福州　３５０１１６） 摘要　采用Ｖｉｂｉｒｏｓｐ．ＺＣ１发酵制备琼胶酶，粗酶液经过中空纤维柱浓缩、硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ阴离子 交换层析，得到一个电泳纯的琼胶酶组分ＡｇａＺＣ１，其分子质量约为４５ｋＤａ，比活力为１１４．６１３Ｕ／ｍｇ。对 ＡｇａＺＣ１进行酶学性质分析，结果表明，其最适反应ｐＨ为７．０，在ｐＨ为５．０～９．０时保温１ｈ仍能保持 ８０％以上的酶活力；最适反应温度为５０℃，在４５℃条件下保温１ｈ酶活力保持在６０％以上。在高浓度 ３＋ ２＋ ２＋ ２＋ ２＋ ２＋ （５ｍｍｏｌ／Ｌ）下，Ｆｅ 、Ｃｕ 、Ｓｎ 和Ｚｎ 能完全抑制琼胶酶的活性，在低浓度（１ｍｍｏｌ／Ｌ）下，Ｃｕ 、Ｂａ 、 ＋ ２＋ ＋ ３＋ ＋ Ｎａ、Ｚｎ 、Ａｇ、Ｓｒ 、Ｋ 对琼胶酶活性具有明显抑制作用。琼胶酶的动力学参数Ｋ 和 Ｖ 分别为 ｍ ｍａｘ ０．５３８ｍｇ／ｍｌ和６．３３ｍｏｌ／（Ｌ·ｍｉｎ），对琼胶底物具有高度专一性，降解产物主要为新琼四糖和新琼六糖。 μ 关键词　琼胶酶　Ｖｉｂｉｒｏｓｐ．　分离纯化　酶学性质 中图分类号　Ｑ５５ 　　琼胶（ａｇａｒ）广泛存在于江蓠、石花菜等红藻细胞壁 应用打下基础。 中，是世界上用途最广的三大海藻胶之一。琼胶由琼 １　材料与方法 脂糖和硫琼胶组成，其中琼脂糖是主要成分，由（１３） ＯＤ半乳糖和（１４）Ｏ３，６内醚Ｌ半乳糖交替组 β α １．１　材　料 成的线形链状分子，在凝胶状态下呈类似ＤＮＡ分子的 １．１．１　菌株来源　Ｖｉｂｉｒｏｓｐ．ＺＣ１为福建省海洋酶工 ［１］ 双螺旋结构 ；而硫琼胶则由长短不一的半乳糖残基 程重点实验室从福建南日岛紫菜中筛选获得。 多糖链构成。 １．１．２　主要试剂　琼胶（生化纯）购于上海生工生物 　　琼胶在科研及工业应用中常作为微生物或细胞培 工程有限公司；Ｄ半乳糖购自国药集团化学试剂有限 养基的载体，广泛应用于组织、病毒培养及癌症的研究 公司；蛋白胨（ｔｒｙｐｔｏｎｅ）、酵母提取物（ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ）购 ［２３］ 等 。琼胶酶是特异性降解琼胶的酶系，主要来源于 于英国Ｏｘｏｉｄ公司；新琼寡糖标准品购于青岛博智生物 海洋微生物、藻类的附生微生物以及一些海洋软体动 科技有限公司；其它试剂均为国产分析纯。 物的寄生微生物，它可用于降解海藻制备单细胞或原 １．１．３　主要仪器设备　隔水式恒温培养箱（ＳＨＰ２５０ 生质体，也可用来酶解多种海藻多糖制备琼胶寡糖。 型，上海精宏实验设备有限公司），高压蒸汽灭菌锅 琼胶寡糖具有抗敏、抗炎、抗肿瘤等生理活性，使其在 （ＹＸＱＬＳ１００ＳＩＩ型，上海博迅实业有限公司），超净工 食品、化妆品、医药等工业领域具有重要的