真菌感染第五组-20130326.pptVIP

II回顾：尸检的分子检测： 实验分析结果： II回顾：尸检的分子检测： 实验分析结果： 回顾性诊断 NZM （ 非接合菌 ） ZM （ 接合菌 ） MNOS （ 非其他特殊类 ） MY （ 单型酵母菌 ） DY （ 双相型酵母菌 ） 组织切片 35 (1例混合真菌感染) 3 (1例混合真菌感染) 5 1 6 差异性鉴定 1 (1例混合真菌感染) 2 (1例混合真菌感染) 5 0 1 Contents 1 2 3 4 5 几个概念 摘要 第一部分 问答 第二部分 Company LOGO Development and Evaluation of Nucleic Acid-Based Techniquesfor an Auxiliary Diagnosis of Invasive Fungal Infections inFormalin-Fixed and Paraffin-Embedded（FFPE）Tissues 第二组全体同学 核酸技术辅助诊断福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织侵入性真菌感染的发展和评价 Contents 1 2 3 4 5 几个概念 摘要 第一部分 问答 第二部分 Contents 1 2 3 4 5 几个概念 摘要 第一部分 问答 第二部分 福尔马林固定石蜡包埋组织 （FFPE Tissue） 以福尔马林为固定液（有利于组织着色），以石蜡浸入组织起到支持作用而制成的显微切片。 原位杂交（in situ hybridization） 将标记的核酸探针 （probe）与细胞或组织中的核酸进行杂交。 几个概念 ISH流程 1.探针合成 2.组织细胞标本制备 3.ISH试剂配制 4.操作: （1）杂交前处理 （2）预杂交 （3）杂交 （4）杂交后漂洗 （5）杂交后检测 （6）结果判断 最重要？ Contents 1 2 3 4 5 几个概念 摘要 第一部分 问答 第二部分 摘要 背景 组织病理诊断 ——金标准； 镜下真菌分辨 ——易致误诊； ISH—— 诊断真菌感染：一种很好的辅助诊断方法 结论 肽核酸探针 （PNA probes）是一种很有效的检真菌方法。 为增加准确性：联合应用组织病理检验和分子探测技术。 内容 用ISH诊断真菌感染； 尸检的分子检测。 Contents Your Slogan here 1 2 3 4 5 几个概念 摘要 第一部分 问答 第二部分 I回顾：原位杂交诊断真菌感染 历史： ISH的基本原理： 探针（probe）的种类： 几种探针： 几种目标序列： ISH的局限性： I回顾：原位杂交诊断真菌感染 一.历史： ISH第一次被用于诊断 真菌感染，是在20年前。 I回顾：原位杂交诊断真菌感染 二.ISH的基本原理： 被标记的探针和互补的目标rRNA或基因 特异性杂交（配对），使显微切片上的真菌被 着色。 I回顾：原位杂交诊断真菌感染 三.探针（probe）的种类： （1）传统核酸探针： 寡核苷酸探针， 双链DNA探针。 （2）人工合成探针： 肽核酸探针（PNA）， 锁核酸探针（LNA）。 I回顾：原位杂交诊断真菌感染 四.几种探针： （1）肽核酸探针（PNA）: 例：基于PNA的特异性rRNA探针对区别念珠菌属很有用。 化学本质：一种核酸类似物。 特殊结构：重复甘氨酸单元构成的中性聚酰胺骨架（而核酸是带负电的磷酸糖骨架）。 I回顾：原位杂交诊断真菌感染 四.几种探针： （1）肽核酸探针（PNA）: 优势： 由于其骨架的特殊性，PNA可以更快速并且高特异性的和互补的核酸杂交。 相较于传统的血培养标本，在FFPE标本上，PNA所需的杂交次数更少，效率很高，检测周期缩短。 I回顾：原位杂交诊断真菌感染 四.几种探针： （2）锁核酸探针（LNA）: 例：双荧光标记的LNA探针对区别镰刀菌属和曲霉菌属很有效。 化学本质：一种RNA衍生物。 特殊结构：核糖环的2P-oxygen和4P-carbon被一个亚甲基连接（一般的核糖环没有被连接）。 I回顾：原位杂交诊断真菌感染 四.几种探针： （2）锁核酸探针（LNA）: 优势： 同样的序列数目下，LNA探针相比于DNA探针，可以产生更强的信号。 I回顾：原位杂交诊断真菌感染 四.几种探针： ↓ 目标？ 五.几种目标序列： 1.rRNA； 2.DNA。 I回顾：原位杂交诊断真菌感染 五.几种目标序列： 1.rRNA： 优势： 对近似微生物的良好区分效果； 真菌本身有着高拷贝数的rRNA基因，因此真菌可以转录出很多rRNA。 I回顾：原位杂交诊断真菌感染 五.几种目标序列： 1.rRNA： 劣势： 真菌中有大量rRNA酶，容易将rRNA降解，而且FFPE标本上的rRNA酶