甲胺磷的核酸适体筛选 - 食品安全质量检测学报.pdf

第4 卷 第2 期 食品安全质量检测学报 Vol. 4 No. 2 2013 年4 月 Journal of Food Safety and Quality Apr. , 2013 1, 2 1 1 1 1 1 2* 张 强 , 胡秋莲 , 张 冠 , 邱 琳 , 陈几文 , 邱洪斌 , 刘贤金 (1.佳木斯大学公共卫生学院, 佳木斯 154007; 2. 江苏省农业科学院 江苏省食品质量安全重点实验室 —省部共建国家重点实验室培育基地, 南京 210014) 摘 要: 目的 筛选识别甲胺磷的 DNA 适体。方法 体外合成 ssDNA 文库, 将其固相化于琼脂糖凝胶颗粒 表面, 液相中甲胺磷与其结合的DNA 分子从固相表面分离, 进而建立非固相化SELEX 技术, 最终获得识别甲 胺磷的适体, 采用 DNAMAN 和 RNA structure 软件对适体进行一、二级结构分析。结果 经过 10 轮筛选, ssDNA 文库与甲胺磷的亲和力呈上升趋势, 随机挑选的20 个阳性克隆适体根据一级结构的同源性可分为5 个 家族, 二级结构预测以茎环结构为主。结论 本方法大大提高了适体的筛选效率, 最终筛选得到能识别甲胺磷 的DNA 适体。 关键词: 甲胺磷; 适体; 食品安全; 检测技术 Selection of aptamer against methamidophos 1, 2 1 1 1 1 ZHANG Qiang , HU Qiu-Lian , ZHANG Guan , QIU Lin , CHEN Ji-Wen , QIU Hong-Bin1, LIU Xian-Jin2* (1. College of Public Health, Jiamusi University, Jiamusi 154007, China ; 2. Key Lab of Food Quality and Safety of Jiangsu Province—State Key Laboratory Breeding Base, Ministry of Agriculture, Jiangsu Academy of Agricultural Science , Nanjing 210014, China) ABSTRACT: Objective To select aptamers against methamidophos. Methods The ssDNA pool which was synthesized in vitro was immoboilized on surface of agarose gel. The ssDNAs that bound methamidophos were released from s