单核增生性李氏杆菌溶血素的原核表达及可溶性分析 - 吉林农业大学学报.pdfVIP

吉林农业大学学报 2012，03 Journal of Jilin Agricultural University E-mail:jlndxb@ 单核增生性李氏杆菌溶血素的原核表达及可溶性分析∗ 1 2 2 3 2 1** 杜丽娟 ，李克生 ，杜惠芬 ， 付宝权 ，连晓雯 ，胡永浩 1. 甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070；2 甘肃省医学科学研究院医学生物中心，兰州 730030；3 中 国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室，兰州 730046 摘 要：对单核增生性李氏杆菌的主要毒力基因 hlyA 进行大肠杆菌原核表达，分析其表达蛋白的可溶性并纯化。根 据 hlyA 基因设计特异性引物，细菌煮沸破裂提取基因组，PCR 扩增出目的条带。连接转化至克隆载体 pMD18-T ， 测序正确后连接表达载体 pET-30a( + ) ，酶切和PCR 鉴定正确后转化至 BL21(DE3) ，构建重组质粒pET-30a-hlyA 。 IPTG 诱导表达蛋白，并分析其可溶性。PCR 扩增的 hlyA 基因全长约 1600bp，成功构建了重组质粒 pET-30a-hlyA ， 转化大肠杆菌诱导表达了溶血素蛋白，SDS分析表达产物，结果显示表达的蛋白分子量约为 60kD ，以可溶性 和包涵体两种形式存在，且以可溶性为主要形式。成功克隆和表达了单核细胞增多性李氏杆菌 hlyA 基因和溶血素蛋 白，并得到纯化蛋白。 关键词：单增李氏杆菌；溶血素；hlyA 基因；原核表达；可溶性蛋白 中图分类号：S85 文献标识码：A 文章编号：1000-5684(2012) DOI: 网络出版地址： /kcms/detail/22.1100.S0938.003.html The expression of listeriolysin O(LLO) gene in Escherichia coli and analysis of soluble LLO protein 1 2 2 3 2 1 DU Li-juan , LI Ke-sheng , DU Hui-fen , FU Bao-quan , Li an Xiao-wen , HU Yong-hao 1.College of Veterinary Medicine,Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China; 2 Medical and Biological Center,Gansu Academy of Medical Sciences Lanzhou 730030, China; 3 Satate Key Laboratory of Animal Parasitology of Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730046 , China Abstract : The hlyA genes were the major virulence factor secreted by the intracellular pathogen Listeria monocytogenes. This research has expressed the hlyA gene by escherichia coli system .Methods: Designing specific primers based on the hlyA gene and amplifying the target gene by PCR