12-张晓娟-7株泡菜发酵益生功能菌种的鉴定--《食品发酵与科技》2012 .docVIP

7株泡菜发酵益生功能菌种的鉴定 张晓娟1,2,3，1,2,3，宋萍1,2,3*，陈功31,2,3，张蓓蓓1,2,3，王菊英1,2,3 （1.四川省微生物资源平台菌种保藏中心成都 611130；2.中国工业微生物菌种保藏中心西南菌种站成都 611130；3.四川省食品发酵工业研究设计院成都 611130） Lactobacillus plantarum)。robiotic Strains from Sichuan Pickles ZHANG Xiao-juan1,2,3，，S Ping1,2,3*，C Gong3，W Zhu1,2,3，ZBei-bei1,2,3，W Ju-ying1,2,3 (1.Sichuan Microbiological Resource Infrastructure Culture Collection Center, Chengdu 611130, China； 2. Southwest Center Of Industrial Culture Collection In China，Chengdu 611130； 3. Sichuan Academy of Food Fermentation Industries, Chengdu 611130, China) Abstract: According 16S rRNA sequences analysis and biochemical and physiological characteristics, 7 probiotic strains from Sichuan pickles were identified as Lactobacillus plantarum. Key words: 收稿日期：2012-作者简介：张晓娟（1979-），女，硕士，工程师，从事微生物菌种资源开发、利用、保藏及标准化整理工作。 基金项目：1.“四川省微生物资源共享平台”；2.“优质安全中国泡菜现代产业关键技术研究与集成示范2009NZ0080-13” ﹡通讯作者：宋萍（1958-），教授菌种站站长。；Tel：028 四川泡菜风味独特，[1] [2]，在泡菜的发酵过程中，乳酸发酵贯穿于整个发酵泡制过程[]，乳酸菌作为一种益生菌，具有阻止致病菌定植、刺激肠道粘膜免疫、降低胆固醇水平，维持肠道菌群平衡等作用[4] [5]。目前对乳酸菌的鉴定主要有以下几种思路和方法，传统的形态学与生理生化鉴定方法[6]- [9]，16S rRNA序列分析[10] [11]，16S rRNA序列分析与生理生化相结合[12] [13]，利用看家基因hsp60，rpoB，atpD，groEL，tuf等对乳酸菌进行鉴定 [14] [15]。 本文以16S rRNA序列分析结果为基础，补充糖发酵试验，准确、高效的对实验室前期分离筛选的泡菜优良益生功能菌进行鉴定，旨在为泡菜直投式菌剂安全生产提供理论指导和依据。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 11#,17#,30#,44#,53#,76#,99#。 1.1.2 培养基 培养基：SL固体培养基。 ：SL液体培养基。 [16]。 1.1.3主要Taq酶、dNTP、DNAmarker购自四川溶海生物技术有限公司；紫外分析仪（WD-9403C） 购自北京六一仪器厂；PCR扩增仪（Mycycler）购自BIO-RAD公司。1.1.4引物 细菌16S rRNA序列扩增引物由北京赛百盛基因技术有限公司合成。 正向引物F1： 5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3, 反向引物R1：5-AAGGAGGTGATCCAGCC-31.2 方法将保菌种活化培养。[16]，并进行图像采集。 1.2.3 PCR扩增 细菌基因组DNA参照文献[]。 PCR反应条件： 95℃ for 5 min ;95 ℃ for 1min ,58 ℃ for 1 min, -0.5 ℃/cycle, 72 ℃ for 1 min ,20 cycles; 72℃ for 5 min ; 94 ℃ for 1 min , 48 ℃ for 1 min , 72℃ for 1 min, 15 cycles; 72℃ for 5 min;4℃ saved, end。 反应体系为50μL： Taq(5U/μL)0.5μL;10×PCR Buffer 10μL;dNTP Mixture(2.5mM/each)1μL;模板DNA1.5μL；引物F1（20μmol/L）1μL,引物R1（20μmol/L）1μL；ddH2O补足到50μL（20μm