生物发光共振能量转移技术在蛋白酶活性检测中的 - 中国医药生物技术.pdfVIP

中国医药生物技术 2016 年2 月第11 卷第1 期 Chin Med Biotechnol, February 2016, Vol. 11, No. 1 47 DOI: 10.3969/j.issn.1673-713X.2016.01.010 ·综述· 生物发光共振能量转移技术 在蛋白酶活性检测中的应用 陈成娟，王伟 生物发光共振能量转移（BRET ）是 20 世纪中叶在海 [22] [23] 蛋白 、无机纳米材料及有机染料 。近年来，随着新型 洋生物，例如维多利亚水母和软体珊瑚虫海肾中发现的一种 荧光素酶和荧光物质的发现和研究，越来越多的荧光素酶和 [1] ，能量从生物发光蛋白如荧光素酶（供体）转移 自然现象 荧光材料被用于 BRET 体系。 到荧光物质（受体）。在软体珊瑚虫海肾中海肾荧光素酶将 海肾荧光素酶（renilla luciferase ，Rluc ）是经典的 BRET 腔肠素氧化，发出波长为 480 nm 的光，与近距离的海肾绿 供体，以腔肠素（coelenterazine ，CLZ ）为底物，发射峰在 色荧光蛋白之间发生一个非辐射的能量转移，发出 509 nm 480 nm 处的蓝色-绿色可见光范围。Rluc 是分子量为 36 kD 的光[1-3] 。实际上，共振能量转移理论早在 1948 年就已经 的单体蛋白，其 N-端、C-端均暴露在外，易于标记。近年 被 Förster 提出并被称为共振能量转移（Förster resonance 来，腔肠素的多种衍生物被开发出来。其中腔肠素 400a ， [4] 。根据供体不同，共振能量转移 energy transfer ，FRET ） 又称深蓝 C ，经 Rluc 催化发射出主峰在 395 nm 的光。不 [5] [6-7] 分为以荧光物质如荧光蛋白 、有机分子 、纳米无机荧 同的 CLZ 衍生物底物最大发射波长不同，在高通量筛选实 光材料等为供体的 FRET 以及荧光素酶或者发光蛋白为供 验中有着不同的特点。这使得 Rluc 在 BRET 技术中得到 体的 BRET[8] 。共振能量转移发生时，供体发出的部分光转 非常灵活的应用，能适应不同吸收波长的受体。 移到受体荧光蛋白，受体发出波长更长的光。共振能量转移 最早发展的 BRET 是以 Rluc 为供体，CLZ 为底物， 只有在受体分子的吸收光谱与供体分子的发射光谱有效重 增强型黄色荧光蛋白（enhanced yellow fluorescent protein， 叠后才能发生。其发生取决于供体分子与受体分子的距离 EYFP ）为受体，可观察到两个最大发射峰，分别在 480 nm