登革热的实验室诊断.PDF

登革熱的實驗室診斷 登革熱實驗室診斷用之臨床檢體的收集與處理 檢體種類 採檢時間 凝血反 保存 運送 應條件 急性期血液 發病後 2-6 小時 血清 -70℃ 乾冰 0-5天 4℃ 恢復期血液 發病後 2-24 小 血清 -20 ℃ 冷凍或室溫 14-21天 時,室溫 組織 死亡後儘 -70 ℃或福 乾冰或室溫 快採集 馬林固定 資料來源: Gubler DJ, and Sather GE. 1988 登革熱的實驗室診斷 病毒分離陽性 測得對抗登革病毒特異性抗體的效價上升 在組織或血清中測得登革病毒的抗原或核酸 登革病毒感染後的免疫反應 抗 症狀期 症狀期 體 效 價 病毒 病毒 病毒分離 檢體: 急性期血清、血漿、或白血球 死亡病例解剖組織 蚊子 檢體貯存條件: 48 小時內分離病毒— +4 ~ +8°C 較長時間保存— -70°C 優點: a. 登革病毒感染的最直接證據 b. 可取得病毒株進行後續研究 限制: a. 需要較熟練的實驗技巧與較昂貴的設備 b. 檢體接種後7-14天才能得到結果 傳統血清學診斷 血球凝集抑制試驗 (HI) 原理: 在控制的 pH 值和溫度條件下，黃病毒可以凝集鵝的紅血球。如 果病毒先與帶有抗體的血清反應，則可抑制紅血球凝集的現象。 HI 抗體再發病後5~6天就可以測得到 (效價≥1:10) 。對於初次感染者， 恢復期血清抗體效價最高可達1:640 ；對於二次感染者，恢復期血清抗 體效價可能達1:5120或更高。 HI 抗體可維持50年。 限制: 特異性低 抗原準備與檢體前處理耗時又耗工 需要有經驗的人員操作 目前少用於登革熱常規檢驗 傳統血清學診斷 補體固定試驗 (CF) 原理: 在抗體-抗原反應的過程中會消耗補體，之後加 入 的致敏化紅血球不會被抗體破壞溶解。反之， 若 出現溶血反應就表示血清中沒有抗體存在。 CF 抗體比 HI 抗體晚出現，持續的時間也較短 限制: 抗原準備與檢體前處理耗時又耗工 需要訓練純熟的人員操作 已罕用於登革熱常規檢驗 傳統血清學診斷 • 中和抗體試驗(NT) 原理: 登革病毒感染某些細胞會造成細胞病變(CPE) ，如果血清 中含有中和抗體，可以抑制病毒感染細胞，進而避免細胞 病變發生。 NT 抗體比CF抗體早，但比HI 抗體晚或同時出現。 NT 抗體可維持50年。 敏感性及特異性比HI 和CF 抗體試驗佳 限制: 設備及材料所需費用較高 需要約7 天才能得到檢驗結果 技術較困難 不適用於常規檢驗 血清學診斷 抗體酵素連結免疫分析法 (IgM, IgG, IgA 和I