荧光标记寡核苷酸探针及其应用.pdfVIP

中　国　生 　物 　工 　程 　杂 　志 第 22 卷第 4 期 JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY 2002 年 8 月 荧光标记寡核苷酸探针及其应用 杜金伟 　张燕玲 (天津医科大学医学检验系 　天津 　300203) 摘要 　寡核苷酸探针的标记非常重要 。近年来 ,用荧光染料对探针进行非放射性标记受到 很大重视 ,并取得了迅速发展 ,广泛应用于核酸序列测定 、基因检测以及疾病诊断等 。以下 就寡核苷酸探针的荧光标记及其应用作一简要综述 。 关键词 　荧光 　寡核苷酸探针 　标记 　　核酸杂交技术出现于上世纪 60 年代 ,发展迅 本文就寡核苷酸探针的荧光标记及其应用作一 速 ,已被广泛应用于分子生物学、分子遗传学及临 综述 。 床医学等学科领域 ,进行基因诊断及核酸的定性、 1 　寡核苷酸探针的荧光标记 定量检测 。核酸探针的制备与标记是关键的一 ( ) 步 ,影响着该技术的应用与发展 。核酸探针是指 常用的荧光素有 : 异硫氰酸荧光素 FITC , 能与特定核苷酸序列发生特异互补杂交 ,而后又 ( ) ( ) 羧基荧光素 FAM , 四氯荧光素 TET ,六氯荧光 能被特殊方法检测的被标记的已知核苷酸链 。根 ( ) ( ) 素 HEX , 四甲6 羧罗丹明 TAMRA , 吲哚二羧 据其来源与性质 ,可分为基因组 DNA 探针、cDNA ( ) 菁 Cy3 ,Cy5 等 。 探针、RNA 探针、cRNA 探针和人工合成的寡核苷 探针的荧光素标记分为间接标记和直接标 酸探针等 5 大类 。近年来 ,合成的寡核苷酸探针 记 。间接标记是指将生物素连接在探针上 ,利用 ( ) 因其独特的优点而倍受关注 ,如 1 可根据需要合 亲和素对生物素有极高亲和力的原理 ,分子杂交 成相应序列 ,链短 ,复杂度低 ,杂交时间短 ; (2) 可 后 ,用偶联有荧光素的亲和素或链霉亲和素进行 识别靶序列内 1 个碱基的变化 , 因为短探针中碱 检测 ;直接标记是通过荧光素直接与探针核苷或 基的错配能大幅度地降低杂交体的 Tm 值 ; (3) 可 磷酸戊糖骨架共价结合 ,或掺入荧光素核苷三 大量合成 ,使得该探针价格低廉 ,且能够用酶学或 磷酸以标记探针 ,杂交后 ,直接检测荧光信号[3 ] 。 化学方法进行非放射性标记[ 1 ,2 ] 。最常用的寡核 11 　间接标记 苷酸探针有 18～30 个碱基 , 目前的DNA 合成仪可 本文仅简要叙述生物素连接于探针或标记 有效地合成 100 个以上碱基的探针 。 探针的方法 。生物素标记寡核苷酸探针稳定 ,不 核酸探针的标记有同位素标记和非同位素 失活 ,应用较多 。 标记两大类 。同位素标记方法简单 ,灵敏度高 , ( )