微生物的分离纯化 - 资源环境学院.pdfVIP

《微生物的分离纯化》实验指导 《微生物的分离纯化》实验指导 《《微微生生物物的的分分离离纯纯化化》》实实验验指指导导 实验类型： 实验学时： 实验要求： 实验类型： 实验学时： 实验要求： 实实验验类类型型：：综合性 实实验验学学时时：：5 实实验验要要求求：：必做 一、实验目的 一、实验目的 一一、、实实验验目目的的 1.掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术。 2.了解不同的微生物在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征。 3.进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术。 二、实验内容 二、实验内容 二二、、实实验验内内容容 本实验的对象是活性污泥的纯种分离和培养。通常，在处理不同水质的废水时，起作 用的微生物群和种类也不同。我们除可用显微镜直接观察微生物形态，大致了解其中的微生 物群外，更重要的还必须研究是哪些种类的微生物对该种废水起生物氧化作用、其作用原理 是什产生什么产物等等，以便提高处理效果。此外，有时我们还需从土壤环境中分离和培养 纯菌种来处理工业废水。因此，为了从事以上这些研究工作，就必须学习微生物纯种分离、 培养及接种的技术，进而再学会做微生物生理生化反应的实验，为废水处理服务。在给水处 理的细菌检查中，细菌的分离、培养和接种也是一个重要环节。 微生物纯种分离的方法有两种：稀释平板法和平板划线法。在本实验中仍要学习这两 种方法。 三、仪器设备 三、仪器设备 三三、、仪仪器器设设备备 恒温培养箱 显微镜 超净工作台 四、所需耗材 四、所需耗材 四四、、所所需需耗耗材材 1.无菌培养皿（直径90mm）、无菌吸管、无菌锥形瓶、无菌试管、5管无菌水（每管有9mL 灭菌过的自来水）。 2.营养琼脂培养基（已灭菌的）、活性污泥。 3.接种环、酒精灯等。 五、实验原理、方法和手段 五、实验原理、方法和手段 五五、、实实验验原原理理、、方方法法和和手手段段 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离于 纯化。常用的方法有 1.简易单细胞挑取法 它需要特制的显微镜操器或其他显微技术，因而其使用受到限制。简易单孢子分离法是一种 不需显微单孢操作器，直接在普通显微镜下利用低倍镜分离单孢子的方法。它采用很细的毛 细管吸取较稀的萌发的孢子悬浮液滴在培养皿盖的内壁上，在低倍镜下逐个检查微滴。将只 含有一个萌发孢子的微滴放一小块营养琼脂片，使其发育成微菌落。再将微菌落转移到培养 基中，即可获得仅由单个孢子发育而成的纯培养。 2.平板分离法 该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理包括两方面： （1）选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养、酸碱度、温度和氧等要求或加入某种 抑制造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生 物。 （2）微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因 此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划 线等技术完成。 值得指出的是从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证事实纯培 养。因此，纯培养的确定观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定， 有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。 土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是说量还是种类都是极其丰富的。因此土 壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到许 多有价值的菌株。 3.物生物的培养特征是指微生物在固体培养基上、半固体和液体培养基中生长后所表现出的 群体形态特征。不同的微生物有其固有的培养特征，这些特征一般用固体、半固体和液体培 养基来进行检测。固体培养基又分平板与斜面两种形式。在平板上主要观察菌落表面结构、 形态及边缘等状况；它们培养在斜面培养基上，可以呈丝线状、刺毛状、念珠状、疏展状、 树枝状或假根状；生长在液体