实验原理乙醇沉淀dna.pptVIP

碱裂解法小量提取质粒DNA 碱裂解法是较常用的质粒DNA提取方法。其优点是收获率高，适于多数的菌株，所得产物经纯化后可满足多数的DNA重组操作。 实验原理 溶液I: GTE 50mM葡萄糖：增加溶液的粘稠度，使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。 25mM Tris-Cl（pH 8.0） 10mM EDTA：是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，可抑制DNase的活性，并抑制微生物生长。 实验原理 溶液II: NaOH/SDS溶液 0.2 N NaOH：是最佳的溶解细胞的试剂，不管是大肠杆菌还是哺乳动物细胞，碰到了碱都会几乎在瞬间就溶解，这是由于细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化所导致。由于质粒和细菌染色体的拓扑结构不同，变性时前者虽然两条链分离，却仍然缠绕在一起不分开；但后者完全变性分甚至出现断裂。因此，在裂解细菌时要注意： 第一，时间不能过长，因为在这样的碱性条件下DNA片断会慢慢断裂； 第二，混合必须轻柔，不然DNA也会断裂。 1% SDS（十二烷基磺酸钠）：是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞裂解，又能使一些蛋白质变性。 实验原理 溶液III：醋酸钾溶液，Ph4.8 当加入pH4.8的酸性乙酸钾降低溶液pH值，使溶液pH值恢复较低的近中性水平时， 质粒的两条小分子单链可迅速复性恢复双链结构，但是主染色体DN