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M5 RNApure 超纯总RNA快速 提取试剂盒使用说明书 产品名称 单位 货号 M5 RNApure 超纯总RNA快速提取试剂盒 50T MF172-05 【储存条件】 室温储存12个月不影响使用效果。裂解液RL可以常温运输，收到后4℃避光可长期保存，常温保存3个月也不影响使用质量。 【产品简介】 改进的异硫氰酸胍/酚一步法（TRIzol法）裂解细胞和灭活RNA 酶， 然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。 【产品特色】 1. 离心吸附柱内硅基质膜全部特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。 2. 结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。 3. 独有的RL裂解液配方，可以有效的消除基因组污染。 4. 多次漂洗去蛋白过程，提取RNA纯度更高。 5. 有效的去除了5S在总RNA中含量，提高了纯度。 【产品组份】 50T 注意事项 裂解液RL 50 ml 4度避光保存 去蛋白液RE 25 ml 室温密闭干燥保存 漂洗液RW 10 ml 初次使用前请按瓶标说明加入指定量的无水乙醇 RNase-Free H2O 10 ml 室温密闭干燥保存 RNase-Free吸附套管 50套 室温密闭干燥保存 【注意事项】1. 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 2. 本试剂盒抑制RNA酶效果极佳，所有离心步骤如未加说明，均可在常温进行。 3. 裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 4. 考虑到环保问题，本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿，使用前需要自备氯仿。 5. 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带，分别为~5Kb（28S），~2Kb（18S），条带亮度比值约为2：1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S，tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4，5条带也属于正常现象，如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。 6. 检测OD260/OD280吸光度比值时，如需稀释RNA样品应该用TE（PH8)，如果用水稀释后检测，由于一般水离子强度和PH值低，会使OD280升高，从而使比值降低。 7. 加入裂解液RL匀浆后，加氯仿前，样品可在 –60℃-70℃ 保存一个月以上。 【操作步骤】 实验前请先阅读注意事项，第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量无水乙醇! 1. 匀浆处理 a. 组织 将组织在液氮中磨碎，每50~100mg组织加1ml的裂解液RL后匀浆。组织样品容积不能超过RL容积的10%。 b. 单层生长的细胞 直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml的RL溶解细胞，并用移液枪轻轻吹打混匀。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的RL量（每10cm2加1ml）。一般情况下，普通大小的细胞培养瓶，加入1ml的RL, 迅速轻摇使RL充分和瓶底所有细胞接触裂解细胞并灭活RNA酶，轻轻用移液枪反复吹打混匀。当RL量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。 c. 悬浮生长的细胞 通过离心来沉淀细胞，小心弃上清。每5~10×106的动物细胞，植物细胞加1ml的RL。在RL试剂中用移液枪反复吹打来裂解细胞。在加入RL前应避免洗涤细胞，否则会增加mRNA降解的可能性。 2. 将匀浆样品剧烈震荡混匀，在15 -30°C条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。 3. 可选步骤：4°C的条件下12,000rpm 离心10分钟，小心取上清转入一个新的RNase free的离心管中。当样品富含蛋白质、脂肪、多糖或是细