牛膝指纹图谱和牛膝皂苷提取及其药理作用的研究.pdfVIP

摘 要 子两要 牛膝僻口幽c彳吐矿口，z历话B砘，z幻神是我国常用中药材之一，具有活血祛淤、补 肝肾、强筋骨、利尿通淋、引血下行之功效，临床上多用于产后淤阻腹痛、跌打 损伤及腰膝酸痛、下肢无力、尿血、小便不利、尿道涩痛等症。牛膝皂苷 (么c砂阳玎珐gs 膝皂苷有兴奋子宫、抗生育作用，抗肿瘤作用，心血管药理作用以及抗炎、镇痛 作用等。 本研究通过光谱学以及蛋白分析作为指纹图谱来鉴别怀牛膝、川牛膝的差 异；在ABS提取优化工艺的基础上，首先测定了其溶血指数，然后探讨了其对 斑马鱼胚胎形态发育的影响，以及对淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞吞噬功能及代 谢的影响，来探讨牛膝皂苷的毒性及药理作用。最后通过腹腔注射研究了其对球 虫免疫鸡免疫功能的影响。 为了分析怀牛膝与川牛膝两个不同品种牛膝化学成分的差异，我们通过紫外． 可见光谱法、红外光谱法、X射线衍射法及蛋白质SDS．PAGE电泳法分别建立两 种牛膝的指纹图谱。结果显示：两种牛膝的紫外光谱、红外光谱与X射线衍射图 谱存在明显差异，可有效区分两者，而其蛋白质指纹图谱相似，不能有效区分两 者。 本文采用正交设计对怀牛膝总皂苷提取方法进行了研究，选择乙醇浓度、溶 剂量、提取时间以及次数作为影响ABS醇提取工艺的4个主要因素。每个因素3 个水平进行试验。结果表明，牛膝皂苷的最佳提取方法为80％乙醇回流2次，每 次加醇8倍量，提取时间为3h。然后以齐墩果酸为对照品，采用香草醛．高氯酸 比色法测定牛膝总皂苷的含量为60％。 为了观察牛膝皂苷的毒性及其药理作用，我们通过溶血试验测定牛膝皂苷的 溶血指数，观察牛膝皂苷对斑马鱼胚胎发育的影响，采用MTT法研究牛膝皂苷 对鸡体外淋巴细胞增殖以及对大鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能及代谢影响等。结果 浓度(1、2 mg／L)牛膝皂苷处理的斑马鱼胚胎，孵化率为100％，高浓度 II 摘要 胞增殖均无促进作用，但在1600p咖l浓度下对T、B淋巴细胞的增殖具有抑制 的代谢有抑制作用。 为了观察牛膝皂苷对肉鸡球虫免疫的影响，我们于18、25、32、39日龄时 采血分离淋巴细胞，通过MTT法测定淋巴细胞转化水平，流式细胞技术检测外 周血CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的动态变化，并检测了不同时期试验鸡增重及脾 指数的变化情况。结果显示：ABS能够提高球虫免疫鸡的淋巴细胞转化水平，升 高CD4+／CD8+比值，各组增重、脾指数均无显著差异，这提示注射用牛膝皂苷能 够促进球虫免疫鸡的免疫机能状态。 以上结果表明，怀牛膝与川牛膝的紫外光谱、红外光谱与X射线衍射图谱存 在明显差异；醇提怀牛膝总皂苷的最佳工艺为8倍量80％乙醇，回流提取2次， 诱导的’B淋巴细胞的增殖作用，并呈现浓度依赖性，但对PHA诱导的T淋巴细 胞无明显促进作用。另外ABS还能能够促进球虫免疫鸡的免疫机能状态。 关键词：指纹图谱；牛膝皂苷；药理作用；球虫；免疫 英文摘要 III Abstract oneof usedCmnesemediclnal R口撕么叻矽臼胛砌西6眈刀幻幻is commonly herbs， wllichhasthe actiVitiesof tlle1iVerand removingsilt，肌triting and bones theeffectofblood on doWnlink，clinicaJ tendons，diuretic，citing congestion blockfor manyi玳gu