淀粉酶淀粉酶的测定 .pptVIP

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2017-07-21 发布于河南
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淀粉酶淀粉酶的测定 .ppt

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淀粉酶淀粉酶的测定

淀粉酶米氏常数的测定 ;一、实验目的 ;二、实验原理 ;以1/v对1/[S]作图，可得一条直线，所得直线的截距是1/Vm，斜率为Km/ Vm。通过Lineweaver-Burk作图法作图后可方便的求出Km值。;试管移液抢秒表吸耳球恒温水浴锅 7200型分光光度计。;三仪器和试剂;（5）0.02mLpH6.0磷酸氢二钠—柠檬酸缓冲液称取磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)45．23g和柠檬酸(C6H8O7·H2O)8.07g，用蒸馏水溶解，用酸度计或pH试纸校正pH，定容至1000 mI。（6）0.2moL/L HCl 取36%盐酸（饱和浓盐酸）0.86ml加入已加有少量蒸馏水的50ml容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀即可。 ;四、实验操作 ; 瓶号试剂; 不同底物(可溶性淀粉)浓度（0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%）可溶性淀粉4mL，缓冲液0.75mL，摇匀后，在60℃水浴中平衡5 min，加入0.25 mL稀释好的酶液，立即记时，充分摇匀，准确反应10 min，立即加入3.0ml的0.2moL/L HCl终止反应，然后立即取出1.00ml溶液置于5.00ml稀碘液显色，摇匀，并以稀碘液作对照，于660nm处测定吸光度（按操作表2操作）。; 瓶号试剂; 酶的反应速度V：以单位时间内吸光度的减少量d(A0-A1)／dt来表示以1/v 对1/[S]双倒数法作图计算Km值。;五、实验注意事项 ;六、思考题