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第二章生物大分子分离纯化技术;2.4. 生物大分子的色谱分离纯化技术;2.4.1 高效毛细管电泳 高效毛细管电泳(High-performance Capillary Electrophoresis, HPCE)是荷电粒子在直流高压的作用下，在毛细管中迁移，从而进行高效、快速分离的一种电泳新技术。其分离是基于带电离子在电场中的不同的电泳淌度。它的基本原理与常规凝胶电泳或自由电泳并无本质的差别。所以，HPCE可以看成是一种仪器化程度比较高的电泳方式。;由于毛细管具有良好的散热性能，从而可以在毛细管两端加上高达30000 V 的高压、分离可以在很短时间内完成，分离效率非常高。这种方法所需样品体积只有?L-nL级。所以，HPEC法的特点为：高效、快速、微量、易于实现自动化，而且溶剂消耗少、环境污染小等等。;仪器 HPCE仪器的基本组成如图所示，它由毛细管，带电极的容器，高压直流电源，进样系统，检测器及数据采集和记录系统组成。比较先进的HPCE仪器还配有毛细管恒温设备，自动采样器，微制备组分收集器和基于计算机的自动化及数据评价系统。;装汗壶碧囊守江褪捶舌歪周篓太琴猿养娟揉昧留涕刹乡跋医评凹杠媳给遇生物大分子的分离和纯化生物大分子的分离和纯化; 1．毛细管 HPCE在毛细管中进行，管内径一般在25~100?m之间，外径在100—400?m之间．长度为0.1~1m。除了石英毛细管外，玻璃、聚四氟乙烯(PTPE)及聚氟乙烯-丙烯毛细管也有使用。; 2．进样系统 为了保证HPCE分离的高效性，进样系统应尽量把nL-pL级的样品以最短的样品区带引入到毛细管中。 一般可采用电动法或流体力学法。; 3．高压直流电源 高压电源需提供高达30 kV的直流电压。检测器位于毛细管的接地端，电流在3~300 ?A之间。电源应能以恒电压或恒电流(ITP)或恒功率的方式工作，其稳定件应达到设置值的?0.1%。另外，电源的正负极应可以切换，以适应带不同电荷的样品的分离。; 4．检测 HPEC这种方法的灵敏度及高效性都依赖于检测器的高灵敏度，实际已经采用的检测器类型有多种。;HPEC中的主要检测技术 检测原理 最低检出浓度(mol/L) 最低检出量 适用范围 紫外－可见吸收法 10-6－10-4 10-15－10-13 通用/特殊情况 基于一般光源的荧光法 10-8－10-5 10-18－10-13 特殊情况 基于激光的荧光法 10-12－10-9 10-21－10-18 特殊情况 热光吸收法 10-8－10-5 10-17－10-14 通用/特殊情况 折射率法 10-7－10-5 10-16－10-14 通用 电导法 10-8－10-6 10-19－10-17 特殊情况 安培法 10-8－10-6 10-19－10-17 特殊情况 质谱法 10-9－10-5 10-17－10-15 通用 放射测定法 10-9－10-7 10-19－10-17 特殊情况;分离模式 HPCE的操作模式有多种，如毛细管区带电泳(Capillary Zone Electrophoresis, CZE)；毛细管等速电泳(Capillary Isotachop