芽孢杆菌的分离筛选和培养.docVIP

芽孢杆菌分离筛选与培养 枯草芽饱杆菌是芽饱杆菌属的模式种，很少成链，通常为0.7~0.8μm×2.0~3.0μm，营养细胞杆状，杆端钝圆，单生或成短链，能运动，革兰氏染色一致呈阳性，芽孢中生或偏生，芽孢呈椭圆或长简形。无荚膜，周生或侧生鞭毛，游离孢子表面着色弱，菌落形态变化较大，粗糙，表面干燥，不透明，灰白色或微带黄色，扩散（蔓延）生长。斜面丰厚粗糙，不透明，蜡质蔓延，奶油色至微褐色。在液体培养基表面形成银白色较厚的具皱纹的菌膜。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，广泛分布在土壤、水体及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖。 琼脂培养基上的菌落圆或不规则形，表面色暗，变厚和不透明，可起皱，可呈奶 油色或褐色，菌落的形状随培养基成分不同而有很大变化。当琼脂培养基表面潮 湿时，菌落易于扩散。在琼脂培养基上生长的菌苔在液体中不易扩散。在培养液 中生成色暗、皱褶、完整的膜，培养液轻度混浊或不混浊。有氧时生长旺盛，在 含有葡萄糖的复杂培养基中可进行厌氧代谢，但其生长和发育都较弱，生长温度 最高为45~55℃，最适为37℃ 枯草芽孢杆菌生理生化特性：液化明胶 冻化牛乳 还原硝酸盐 不产生吲哚，硫 化氢 V-P反应阳性，水解淀粉。葡萄糖发酵产酸不产气，需氧。 地衣芽孢杆菌孢囊不膨大，无伴孢晶体，中生卵圆型芽孢，周围鞭毛， 无荚膜。革兰氏液染色呈紫色阳性菌。细胞大小一般在0.9~1.2×2.2~3.8微米。菌落呈灰白色、边缘不整齐的扁平菌落。 1.样品：外购菌种 商品微生物制剂（固体或液体） 土壤水体或枯枝烂叶，腐烂稻草（记录取样位置 PH 植被情况等）。 2.菌种分离与纯化 2.1．培养基 2.1.1可溶性淀粉3g/L 蛋白胨10g/L 酵母膏3g/L KH2PO41.5g/L K2HPO42g/L MgSO4 0.1g/L PH 7.4—7.6 （富集用） 2.1.2 肉汤（NA）培养基（营养琼脂）： 蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl5g/L PH7.2—7.4（保存计数或分离纯化用） 营养琼脂：麦芽汁培养基=1：1混合使用，菌落不易扩散，形态特征典型 2.1.3蛋白胨 10g/L 酵母膏 5g/L 葡萄糖3.5g/L NaCl5g/L K2HPO4 0.5g/L MgSO4 3g/L MnSO4 25mg/L PH 7.2—7.4（分离纯化用） 2.1.4产淀粉酶菌株筛选培养基： 可溶性淀粉3-5g/L 蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl 5g/L PH7.2—7.4（用于淀粉酶产生菌分离筛选） 2.1.5产蛋白酶菌株筛选培养基 2.1.5.1酪素培养基： ★★2.1.5.1.1葡萄糖1g/L，酵母膏1g/L，酪素4-5g/L，K2HPO4 1g/L，KH2PO4 0.5g/L，MgSO4 0.1g/L 蒸馏水1000ml， pH7.0-7.2。 另：葡萄糖0.5g/L，酪素10g/L，NaCl 5g/L K2HPO4 0.5g/L，KH2PO4 0.5g/L， 琼脂20g/L pH7.2-7.42.1.5.1.2牛肉膏3g/L或酵母浸粉5g/L 酪素10g/L NaCl 4-5g/L PH7.2—7.4 先将酪素用少量2%氢氧化钠润湿，玻棒搅动，再加适量的蒸馏水，在沸水浴中加热搅拌至完全溶解（10-15min），补足1000mL蒸馏水，加入其他成分，调PH分装灭菌。 2.1.5.1.3酵母膏0.05g/L 酪素4g/L KH2PO4 0.36g/L Na2HPO4 1.1g/L MgSO4 0.5g/L NaCl 0.16g/L FeSO4 0.002g/L CaCl2 0.002g/L ZnCl2 0.014g/L pH6.5-7.0 4℅酪素母液制备：4g酪素溶解于0.1N的30-35mL的氢氧化钠溶液中，水浴溶解20min，溶解完毕后加入60-70℃热水定溶到100mL.200mL培养基加20mL. ★★2.1.5.2脱脂奶培养基： 牛肉膏3g/L（酵母浸粉5g/L） 蛋白胨10g/L NaCl5g/L 脱脂奶粉10-12g/L，PH7.2（用于蛋白酶产生菌的筛选） 将脱脂奶（粉）加水溶解制成10℅溶液，于115℃加热灭菌20-30min，与牛膏蛋白胨固体培养基1：9混合均匀倒平板。 2.1.6纤维素产生菌培养基： CMC-Na2g/L 蛋白胨 10g/L 酵母膏5g/L NaCl5g/L PH7.2-7.4