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免疫分析法在农药残留分析中的应用 应化1007班 刘洋 2010016197 【摘要】基于抗原与抗体特异性反应的免疫分析技术(IA)具有灵敏度高、快速、方便筒捷的特点，尤其适宜现场筛选和大量样品的快速分析。本文简要介绍了农药残留免疫分析方法及免疫分析技术在杀虫剂、杀菌剂、除草剂和生长调节剂等农药残留快速监测中的应用进展。 【关键词】农药残留 免疫分析 1.引言 农药的大量使用所造成的环境污染问题，已引起人们的高度重视。随着环保意识的加强和经济的发展，我国对环境、食品中农药残留的监测，也日益重视。加强对农药残留监测研究，对于合理使用农药、保护环境和保障人类健康，具有重要的理论和现实意义。随着待检样品逐步增多和对农药残留检测灵敏度、效率要求的提高，对高灵敏度、快速检测分析新技术的开发需求也日益迫切。传统的农药残留分析方法有液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、质谱(MS)等多种理化分析手段，存在样品前处理复杂，仪器设备昂贵，且要求熟练的技术人员，完成一次分析费时长等问题。特别是这些方法不能满足样品现场快速检测的要求，迫使人们运用新的原理和方法去开发特异性强、灵敏度高、方便快捷、安全廉价的分析新技术。免疫化学分析技术灵敏、简便快速，正可以满足这些需求，受到农药残留检测工作者的重视，正逐渐成为农药残留快速检测的一个热点，并显示出独特的优势。 2.免疫分析法的概念 免疫分析法(Inununoassay IA)是一种抗体作为生物化学检测器对化合物、酶或蛋白质等物质进行定性和定量分析的分析技术。20世纪90年代以来它在检测粮食、水果 蔬菜、肉、奶、水和土壤中农药的残留分析上得到迅速发展，成为扰先研究、开发和应用的一项分析技术。 免疫分析法具有特异性强、灵敏度高(检测极限可达l～l000 ng/ml)、方便快捷、分析容量大、检测成本低、安全可靠等优点。一般不需要贵重仪器，可大大简化甚至省去前处理过程，对使用人员的专门技术要求不高，容易普及和推广。该技术开发的产品—检测试剂盒，可广泛应用于现场样品和大量样品的快速检测。因此，人们称免疫分析技术是21世纪最具竞争性和挑战性的检测分析技术。 3.农药残留免疫分析技术及方法 3.1 免疫分析标记抗体的类型 农药残留的免疫分析方法是在已有免疫学实验的基础上建立起来的，因此它的免疫学反应原理及操作过程都与其他免疫检测方法相类似。用于农药残留免疫分析上的抗体标记方法主要有4种类型，即放射性标记、酶标记、生物素标记和荧光抗体标记。早期的农药残留免疫分析标记抗体主要是以碘标记为主，但由于这种标记方法半衰期短，而且对环境和人有潜在的危险性，因而逐步被酶标记所替代，由此建立的方法称为酶免疫分析法(EIA)：酶标记的抗体保存期长，具高敏感性，显示结果直观并可进行光谱分析，这为农药残留定性、定量分析带来很大的方便。标记在抗体上的酶主要是辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶和S—半乳糖苷酶在检测过程中，当加人适当的底物时产生特殊的颜色反应，用于检测 此外，生物素标记和荧光抗体标记检测农药残留的应用也有不少报道。 3.2 农药残留免疫分析检测方法 用于农药残留免疫分析反应的类型绝大多数是抗体或抗原竞争型反应，其检测方法有两种：一种是抗原捕获法，将已知量的标记抗原与含有未知量的待测抗原混合在一起，然后将该混合液与吸附在固相上的亚饱和量抗体孵育，检测液中含量高的抗原将减少标记抗原的结合，这样通过已知标准曲线定量出不同目标检测物的浓度；另一种是“三明治”分析法，是先把抗原吸附在固相上，然后将混有待测抗原的一抗抗体混合液与吸附在固相上的抗原孵育，冲洗掉已结合的抗体，再加人酶标记的二抗抗体与其共同孵育，最后测定标记抗体上酶催化底物产生的光吸收值的大小来确定农药残留的量，也可将一抗抗体直接用酶标记，然后测定结台抗体上的酶所催化底物产生的颜色反应。酶标记反应的固相支持物有聚苯乙烯、塑料管、膜和微球。目前大多数采用96孔酶标板(MTP)作为固相支持物，这种板的检测容量大，样本数量多，其检测反应结果只需有酶标仪的配台就可得出准确的检测数据，与其他检测手段相比，此种方法更易被使用者接受。 3.3 利用生物传感器进行免疫分析 生物传感器通常是指由一种生物敏感部件与转换器紧密结台，对特定种类化合物或生物活性物质具有选择和可逆响应的分析装置。免疫反应传感器是利用目标化合物与抗体的特异性接合，产生一系列的物化反应，利用转移器使其将完成特定形式的反应信号，再通过监视器把这些特殊信号变成可视数据用于检测。最早研制成功的是对硫磷的生物传感器，以后又有人制成了光导纤维免疫传感器，利用荧光标记抗体产生的反应，对对硫磷在溶液中含量进行了分析测定。微型化的免疫传感器对分析样品的用量少、响应速度快，可进行快速跟踪分析。目前生物传感器主要存在问题是分析结果的稳定性、可重