一株用于青贮万寿菊的植物乳杆菌的分离、鉴定及发酵工艺研究.pdfVIP

广东饲料 第22卷第7期 2013年7月 一 株用于青贮万寿菊的植物乳杆菌 的分离＼鉴定及发酵工艺研究 孙丹丹 陶正国 吴秀丽 (广州立达尔生物科技股份有限公司，广东广州 510663) 中【图分类号】S816．7 [文献标识码】A 文【章~ -]1005—8613(2013)07—0018-04 摘【要】本研究分离鉴定了一种来源于青贮万寿菊的乳酸茵，并探索其发酵工艺。通过菌落形态、生理生化特性和 16SRNA 的序列分析，确定分离得到的为植物乳杆菌(Lacmbacillusplantamm)，命名为ldr一1。在单因素实验基础上，采用响应面法优化 发酵工艺条件，以碳源、氮源和起始pH值三者为响应因子，以活菌数为响应值，采用Box—Behnken模型进行三因素三水平的 响应面实验设计。分析表明，该模型不显著，所以，单因素试验条件即为此三因素的最佳添加量。在发酵工艺为玉米蛋白粉 15％，蛋白胨25％，起始pH6．0，30℃发酵 16h后 ，活菌数可达到4．0×10c~／mL。经过海藻酸钠、氯化钙包被并冻干后，冻干存 活率为84．95％，大大增加了对外界温度的稳定性。上述试验为ldr一1作为万寿菊青贮剂的开发应用奠定了基础。 关『键词】植物乳酸菌；发酵；青贮；万寿菊 万寿菊(Tageteserecta)为一年生菊科万寿菊属 菌，经 16SRNA鉴定与序列比对，确定为植物乳杆 植物，是提取天然叶黄素的良好原料，在中国黑龙 菌，命名为ldr一1。参考其它植物乳杆菌的发酵条件 江、云南 、内蒙古 、山东等地大规模种植 (凌关庭 ， 研究(陈琳，2011)，根据单因素试验结果，建立三因 2002；芦新友，2004)。在收获万寿菊花后，放人发酵 素三水平的响应面模型，探索了植物乳杆菌生长所 池，逐层均匀喷洒乳酸菌菌液和酶制剂，压实密封 ， 需的碳源、氮源、起始 pH对活菌数的影响，确定了 使其快速发酵 ，再经过压榨、烘干、制粒 、提取和浓 最佳发酵工艺，及后续乳酸菌包被冻千方法。 缩，得到叶黄素树酯(郭书丛等，2006；张伟，2009)。 1材料与方法 在上述过程中，万寿菊花青贮是必不可少的前 】．1试验材料与试剂 处理过程，通过青贮 ，可有效保护鲜花中的色素含 植物乳杆菌，为本实验室从青贮万寿菊中分离 量，降解植物细胞壁，分离鲜花中阻碍提取的成分， 得到； 使色素更易被萃取(李大婧等，2008)。 克隆测序载体：pMD19一Ysimplevector； 在万寿菊青贮中，乳酸菌起到举足轻重的作 细菌基因组提取试剂盒：北京康为世纪生物科 用，它能在发酵过程中迅速繁殖并产生大量乳酸和 技有限公司； 乙酸，抑制有害菌生长，防止鲜花腐烂、发霉 ，同时 胶 回收试剂盒：瑞士Roche公司； 软化细胞壁，使以后的提取条件较为温和(兴丽等， 质粒提取试剂盒：美国Axygen公司。 2004)。但是，目前青贮用乳酸菌的研究大多集中于 1．2试验设备 玉米、紫花苜蓿等常见饲料原料 ，关于万寿菊青贮 PCR仪、凝胶电泳仪 、超净工作台、高速离心 的研究不多，相应的产品市场上也只有零星数种 ， 机、发酵罐等。 主要以进 口产品为主。 1．3试验设计 本研究从青贮的万寿菊中分离得到一株乳酸 1．3．1菌株分离 取青贮过的万寿菊，用接种针接人 MRS培养 收【稿 日~]]2013-06—12 基30~C培养36h，取培养液在琼脂平板上划线，静 · 18 · 广东饲料 第22卷第 7期 2013年7月 置培养。如出现圆形稍扁平的白色菌落及其周围培