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荔枝皮中多酚类物质的提取分离及其抗氧化性能研究 中山大学化学与化学工程学院5 摘要回流， 关键词辅助提取 抗氧化性 荔枝作为中药或其他食疗用途时，通常采用荔枝果肉，而大量荔枝果皮则作为废弃物丢弃，不仅造成环境污染，而且一种 图1 类黄酮类多酚的骨架结构 多酚类化合物的提取分离方法多种多样。经典的提取方法主要是有机溶剂提取法，这种提取方法不需要特殊的仪器，应用较为普遍，但存在产品安全性低、耗时长、提取率不高等缺点。随着科学技术进步，一些以先进仪器为基础的新型提取方法，如超声波辅助提取、微波辅助提取技术等，以其高效、节能、环保等优点，得到越来越广泛的应用。 DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，呈紫色，在517 nm有强吸收。有自由基清除剂存在时，DPPH的单电子被配对而使其颜色变浅，在最大吸收波长处的吸光度变小，这种颜色变浅的程度与配对电子数成化学剂量关系。因此，可根据该波长处的吸光度检测自由基的清除情况，从而评价样品的抗氧化能力。 本实验以作为桂味的果皮为研究对象，分别以传统溶剂回流、超声辅助提取荔枝皮中的多酚类物质，通过紫外光谱（UV）研究多酚类物质的组成和含量，同时采用 DPPH 法测定荔枝皮乙醇提取物中总多酚的抗氧化性能。 实验过程 紫外可见分光光度计(Varian)，分析天平（0.1 mg）。其他一般实验室常用仪器。 2.2 实验试剂 2.3实验步骤 2.3.1 溶剂回流提取法：准确称取在60℃烘干的洁净荔枝皮样品5.0 g，加入150 mL 95%乙醇溶液，水浴加热并h。过滤并用95%乙醇定容200 mL备用。平行两次实验。 超声波辅助提取法：准确称取在60℃烘干的洁净荔枝皮样品2.0 g，加入30mL 95%乙醇溶液，超声提取30 min。过滤并用95%乙醇定容至50 mL备用。平行两次实验。 2.3.2 Folin-Denis 法测定荔枝皮中总多酚的含量 a. 福林酚试剂。 b. 没食子酸溶液（100 mg/L）：准确称取10.0 mg 没食子酸标准品，用水溶解后定容至100 mL 容量瓶中，摇匀备用，现配现用 c. 样品溶液配制：准确移取适量提取液至 50 mL 容量瓶中，用95%乙醇稀释备用。 d. 标准曲线绘制：取7支10 mL具塞比色管，准确移取没食子酸溶液（100 mg/L）0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.20、1.60 mL，加入1.2 mL福林酚试剂，摇匀后静置5 min，加入3.0 mL 5 %的Na2CO3溶液，用水定容至10.0 mL，室温下避光放置30 min，于644 nm 波长下测定标准系列溶液的吸光度，绘制标准曲线。 e. 样品中总多酚含量的测定：取适量样品溶液在上述 2.4 条件下测定其吸光度，计算样品中总多酚的含量，比较不同提取方法对荔枝皮中多酚的提取效果。 f. 回收率测定：通过向原料中加入一定量的没食子酸，重复提取测定过程，检测产品回收率。 2.3.3 荔枝皮中总多酚的抗氧化性能研究 a. IC50 测定步骤：吸取系列样品溶液，分别加入5.0 mL 50 mg/L DPPH-乙醇溶液，静置60 min，于517 nm 处测定反应液的吸光度并计算其抑制率。以吸取的样品量（浓度或质量）与相应的抑制率作图，图中抑制率为50%时对应的样品量为其IC50 值。 b. 没食子酸与Vc的抗氧化性对比：配制/L的没食子酸与结果与讨论 表 标准曲线测定数据 ID 1 2 3 4 5 6 浓度mg·L-1 2.000 4.000 6.000 8.000 12.000 16.000 吸光度 0.188 0.381 0.555 0.731 1.157 1.494 图 线性方程为y=0.09427x-0.00313相关系数r2=0.9988 表2 不同萃取条件下提取量（稀释50倍） 条件 序号 浓度mg·L-1 吸光度 含量mg·g-1 mg·g-1 标准差 回流 1 11.203 1.053 22.406 22.380 0.037 2 11.177 1.051 22.354 超声 1 13.120 1.109 16.400 0.691 2 14.061 0.946 17.576 可见，溶剂回流技术提取的效果较好，也较高回流方法算得平均值为22.380 mg·g-1标准差0.037故样品中多酚含量为22.380 ±0.037 mg·g-1超声辅助提取法测得样品平均含量为 mg·g-1，标准差为故样品中多酚含量为16.988 ±0.691 mg·g-1 表3 不同萃取条件下回收率测定（稀释100倍） 条件 序号 测定含量 mg·g-1 加入量 mg·g-1 浓度 mg·L-1 吸光度 含量 mg·g-1 回收率 % % 精密度 回流 1 22