NA的制备及纯度的鉴定ppt.pptVIP

注意事项 1：在操作中当加入变性剂氯仿后，为了保证核酸样品的完整性，操作要轻，尤其在提DNA时，更要避免剧烈操作 2：在沉淀核酸时可用乙醇与异丙醇，乙醇的极性要强于异丙醇，所以一般用2V乙醇沉淀，但在多糖、蛋白含量高时，用异丙醇沉淀可部分克服这种污染，尤其用异丙醇在室温下沉淀对摆脱多糖、杂蛋白污染更为有效。 * 3：在提取核酸时，如样品浓度低，则应增加有机溶剂沉淀时间，－70℃下30min;－20℃过夜将有助于增加核酸的沉淀量。 4: RNA通常用分光光度计定量，测量在260 nm处的吸收值（A260）。通常分光光度计A260的读数要介于0.15-1.0之间才是可靠的，因此RNA提取结束后，要根据大概产量稀释到适当浓度范围，再用分光光度计测量。A260为1相当于RNA的浓度为40 μg/ml。 * 问题及答案 一、提取制备RNA常用的方法有那几种？ 主要有苯酚、异硫氰酸胍、CTAB、LiCl密度梯度、Trizol等方法。 二、制备RNA应注意哪些问题. 1.整个过程应注意预防RNA酶的污染 2.匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。 三、地衣酚反应中，干扰RNA的测定因素有哪些？如何能减少他们的影响？ 1.DNA，地衣酚反应特异性较差，凡戊糖均有此反应，DNA及其他杂质也有影响。故一般测定RNA时，可先测定样