生物化学技术沉淀法.pptVIP

第二章 沉 淀 法; 沉淀法是分离纯化生命大分子物质常用的一种经典方法；其特点是：操作简单，成本低廉 常见的方法有盐析、有机溶剂沉淀、蛋白质沉淀、PEG沉淀、选择性沉淀、结晶沉淀等;掌握沉淀法的基本原理及影响因素 掌握沉淀类型及其在制备蛋白质、核酸中作用原理 熟悉沉淀法在制备蛋白质和核酸过程中的实际运用 ;第一节 基本原理与沉淀类型;一、基本原理;二、制备蛋白质;2.基本步骤;（1）盐分级沉淀;② （NH4）2SO4盐析;硫 酸 铵 对 尿 素 酶 的 沉 淀 作 用;调 整 硫 酸 铵 溶 液 饱 和 度 计 算 表;饱和溶液法;透吸法;（2）制作盐析曲线; 典 型 盐 析 曲 线 ; 由表可知，若生物材料来源容易，主要是考虑提高纯化倍数时，选择48%~65%盐饱和分级范围，酶的纯化倍数可达3.0，而得率仅为75%；若生物材料来源较困难，主要是考虑提高收得率时，则选择45%~70%??至45%~75%盐饱和分级范围，酶的收得率可达80%以上，而纯化倍数将≤2.4;（3）影响盐析的因素; 在pH7.0溶液中几种蛋白质的β和KS常数 （溶解度S以mg/ml表示）;②盐分级范围的差异性;③ pH和盐浓度;④蛋白质的纯度和浓度;⑤其他;（4）脱盐;(二)有机溶剂沉淀法;4.注意事项：;（三）蛋白质沉淀法;2.凝集素;;（五）选择性沉淀;（六）结晶沉淀法;三、制备核酸;（一）DNP/RNP复合物的解聚;2.加有机溶剂;3.蛋白酶处理;（二）消除多糖等杂质;2.DNA与RNA的分离;（三）核酸沉淀;1.有机溶剂沉淀法;②异丙醇 操作：在含有DNA的溶液中，加入0.3mol/L的NaAC和0.54~1倍体积 的异丙醇，短时间放置后离心，得到核酸沉淀 核酸沉淀的形状与其分子量密切相关：M＞106Da的双链DNA呈丝状纤维样； 小分子量的双链DNA呈凝胶状 缺点：异丙醇沸点高，不易从核酸中除去，且蔗糖、 NaCl等易和DNA共沉淀;2.PEG沉淀法;3.CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法;第二节 实例应用