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微囊藻毒素合成酶基因的PCR检测方法

热带亚热带植物学报 2005,13(4):315-318 JournalofTropicalandSubtropcialBotany 微囊藻毒素合成酶基因的PCR检测方法 谢数涛 ,龙思思 ,韩博平 ,林少君 ,钟秀英2,林桂花2 (1.暨南大学水生生物研究中心,广州510632;2.广东省水文局,广州 510150) 摘要:针对微囊藻毒素合成酶基因簇的核酸序列,筛选特异性引物,探索一种适用于 自然水样中微囊藻产毒潜能检测 的全细胞PCR方法。经灵敏度测试表明,这种PCR方法的检测下限相当于 100cells。该方法不需要提取基因组DNA, 检测所需水样量少,具有操作简便、快速、成本低、灵敏度高等优点,能应用于水库等饮用水源水体中具有产毒潜能的 微囊藻的检测。 关键词:微囊藻;微囊藻毒素;PCR;mcyB;水库 中图分类号:Q949.22 文献标识码 :A 文章编号:1005—3395(2005)04—0315—04 A PCR M ethodforDetectionofM icrocystin SynthetaseGene XIEShu—tao,LONGSi-si,HANBo—ping,LINShao—jun,ZHONGXiu—Ying,LINGui—hua (1.ResearchCenterofHydrobiology, nn凡University,Guangzhou510632,China; Abstract:Basedonthesequencesofmcygenesfrom Microcystis,aspecificprimerpairwasdetermined.PCR— mediated detection of眦 yB genewasdeveloped and appliedto the identification ofpotentialmicrocystin producedrfomMicrocystisstrainsinnaturalwaterbodies.ThesensitivityofPCRmethodwasinvestigated,andthe detectionlimitwasasfew as100cellsperreaction.ThemethoddoesnotrequireextractionofthegenomicDNA ofMicrocystis,anddoesnotneedlargevolumeofwatersamples.Itissimple,sensitive,rapidandeconomicalwhich callbeusedforthedetectionofthetoxicMicrocystisstrainsinwatersourcesofrhumanconsumption. Keywords:Microcystis;Microcystin;PCR;mcyB;Reservoir 微囊藻毒素是一种危害很大的藻类毒素,其在 物的识别需要广谱抗体,这极大地限制 了该方法的 自然环境 中分布不均,同一水体中其毒性大小及有 实际应用 。此外,上述方法都是针对微囊藻毒素进 无也不恒定 l【】。近年来对微囊藻毒素毒理的研究以 行检测,因此不能在微囊藻毒素产生之前,对水体 及肝炎、肝癌的流行病学的调查发现,饮用水源受 中微囊藻的产毒潜能进行判断或预测,从而难 以满 微囊藻毒素污染可能是某些地区肝炎、肝癌高发的 足水文部 门有效监测饮用水源质量的要求 。 原因之一2【】。因此对饮用水源水体中的产毒微囊藻 自1999年 Nishizawa等发现了3个与微囊藻 进行检测非常必要。 毒素合成有关的基因后 【,用PCR方法对微囊藻的 目前,用于微囊藻毒素的检测手段主要有小 鼠 产毒潜能进行检测成为可能。Fergusso等4[1和潘卉 法、HPLC、ELISA 以及细胞毒性监测法等 。小鼠法、 等 【】的研究表 明,PCR方法可 以运用于微囊藻产毒 HPLC以及细胞毒性监测法对实验条件要求较高,

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