微囊藻毒素合成酶基因的PCR检测方法.pdf

热带亚热带植物学报 2005，13(4)：315-318 JournalofTropicalandSubtropcialBotany 微囊藻毒素合成酶基因的PCR检测方法 谢数涛 ，龙思思 ，韩博平 ，林少君 ，钟秀英2，林桂花2 (1．暨南大学水生生物研究中心，广州510632；2．广东省水文局，广州 510150) 摘要：针对微囊藻毒素合成酶基因簇的核酸序列，筛选特异性引物，探索一种适用于 自然水样中微囊藻产毒潜能检测 的全细胞PCR方法。经灵敏度测试表明，这种PCR方法的检测下限相当于 100cells。该方法不需要提取基因组DNA， 检测所需水样量少，具有操作简便、快速、成本低、灵敏度高等优点，能应用于水库等饮用水源水体中具有产毒潜能的 微囊藻的检测。 关键词：微囊藻；微囊藻毒素；PCR；mcyB；水库 中图分类号：Q949．22 文献标识码 ：A 文章编号：1005—3395(2005)04—0315—04 A PCR M ethodforDetectionofM icrocystin SynthetaseGene XIEShu—tao，LONGSi-si，HANBo—ping，LINShao—jun，ZHONGXiu—Ying，LINGui—hua (1．ResearchCenterofHydrobiology, nn凡University，Guangzhou510632，China； Abstract：Basedonthesequencesofmcygenesfrom Microcystis，aspecificprimerpairwasdetermined．PCR— mediated detection of眦 yB genewasdeveloped and appliedto the identification ofpotentialmicrocystin producedrfomMicrocystisstrainsinnaturalwaterbodies．ThesensitivityofPCRmethodwasinvestigated，andthe detectionlimitwasasfew as100cellsperreaction．ThemethoddoesnotrequireextractionofthegenomicDNA ofMicrocystis，anddoesnotneedlargevolumeofwatersamples．Itissimple，sensitive，rapidandeconomicalwhich callbeusedforthedetectionofthetoxicMicrocystisstrainsinwatersourcesofrhumanconsumption． Keywords：Microcystis；Microcystin；PCR；mcyB；Reservoir 微囊藻毒素是一种危害很大的藻类毒素，其在 物的识别需要广谱抗体，这极大地限制 了该方法的 自然环境 中分布不均，同一水体中其毒性大小及有 实际应用 。此外，上述方法都是针对微囊藻毒素进 无也不恒定 l【】。近年来对微囊藻毒素毒理的研究以 行检测，因此不能在微囊藻毒素产生之前，对水体 及肝炎、肝癌的流行病学的调查发现，饮用水源受 中微囊藻的产毒潜能进行判断或预测，从而难 以满 微囊藻毒素污染可能是某些地区肝炎、肝癌高发的 足水文部 门有效监测饮用水源质量的要求 。 原因之一2【】。因此对饮用水源水体中的产毒微囊藻 自1999年 Nishizawa等发现了3个与微囊藻 进行检测非常必要。 毒素合成有关的基因后 【，用PCR方法对微囊藻的 目前，用于微囊藻毒素的检测手段主要有小 鼠 产毒潜能进行检测成为可能。Fergusso等4[1和潘卉 法、HPLC、ELISA 以及细胞毒性监测法等 。小鼠法、 等 【】的研究表 明，PCR方法可 以运用于微囊藻产毒 HPLC以及细胞毒性监测法对实验条件要求较高，