乙酰辅酶A氧化酶(EC1.3.3.6).PDFVIP

APIS--Your Partner in Life Sciences Chemistry Research 乙酰辅酶 A 氧化酶 (EC 1.3.3.6) （来源于基因工程菌） ACYL-CoA OXIDASE (ACOD) ：RECOMBINANT AA0078A ACOD Acyl-CoA + O Tranns-2,3-Dehydroacyl-CoA+H O 2 2 2 一、产品介绍 外 观： 微黄无定形粉末 比 活 性： ≥15U/mg 稳 定 性： -20℃至少稳定一年 分 子 量： 大约75KD 等 电 点： 6.0 抑 制 剂： 不受叠氮钠的抑制 pH 稳定性： 6.0～8.5 （37℃，2hr. ） （Fig.3-1 ） 最 适 pH ： 7.0～9.0 （Fig.3-2 ） 最适温度： 35℃～50℃ （Fig.3-3 ） 热稳定性： 45 ℃以下稳定(15min.) （Fig.3-4 ） 二、酶活测定方法 1. 原理 ACOD 棕榈酸辅酶A + O 2-Hexadecenoyl-CoA + H O 2 2 2 POD 2H O + 4-AA + 苯酚 醌亚胺 + 4H O 2 2 2 2. 酶活定义 1 个酶活单位等于在以下3.要求的反应条件下1 分钟生成1 微摩尔H2O2 （对应1/2 微摩尔醌染料） 所需要的酶量。 3. 检测方法 3.1 稀释液的配制 在800 毫升去离子水中，加入2.3 克磷酸二氢钾、22.8 克磷酸氢二钾，搅拌溶解，用氢氧化钾调节 pH 到7.60，定容至1 升。 3.2 酶活检测试剂配制方法 3.2.1 试剂的配制 试剂A ：24.23 克Tris 加入800 毫升水，搅拌溶解，在25 度下，用盐酸调节pH 到8.00； 试剂B ：15 毫摩尔4-AA 溶液（0.305 克4-AA 溶于100 毫升水中混匀。） 试剂C ：0.2% （W/V ）苯酚溶液（2 克苯酚溶于1 升水中溶解）； 试剂D ：浓度为50 U/ml 的POD 溶液（5ku 酶用100 毫升试剂A 溶解）； 试剂E ：1% （W/V ）Triton X-100 溶液（10 克 Triton X-100 加入1 升水中溶解）； 试剂F ：用2 毫升的稀释液溶解 10 mg 棕榈酸辅酶A ； 试剂G （乙酰辅酶A 氧化酶稀释液）：使用前在3.1 配制的稀释液加入FAD 单钠盐至8 毫克/升、 加ATP 至1.52 克/升，此为乙酰辅酶A 氧化酶稀释液。 3.2.3 待测样品的配制 10mg 3.3 酶活检测步骤 比色杯中按比例依次加入以下试剂：0.2毫升的试剂A 、0.1毫升的试剂B 、0.1毫升试剂C、0.1毫升试 剂D 、0.1毫升试剂E 、0.1毫升试剂F 、0.3毫升去离子水。37℃预热300秒后加待测酶液0.02毫升，在