大肠杆菌感受态细胞转化能力的影响因素.PDFVIP

细胞生物学杂志 Chinese Journ al of Cell Biology 2004 , 26: 429- 432 http://www . 大肠杆菌感受态细胞转化能力的影响因素 张岚岚 徐春燕徐昌 杰 * ( 浙江大学园艺系， 农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验室， 杭州、1 3 10029) 摘要 探讨了大肠杆菌菌林、 细菌生长状态、转化溶液、抗冻剂及保存时间 、质粒长度和 纯度对感受态细胞转化能力的影响。 结果表明 ，以 100 mmo l/L CaC1 为缓冲液，采用 经活化培养 2 7 6 0.55 的TGl 制备的感受态细胞， 在冰上放直6h后转化，所得转化率最高， 可达2xl0 -4x 10 A 的 制为 志 cfulμg DNA(pUCI9) 。 随着质粒长度增加和纯度降低， 转化率有所下降。 若感受态细胞要保存备 用 ，以 15% 甘油为抗冻剂优于 7% DMSQ， 但添加抗冻剂对转化率有抑制作用。贮于甘油的感受 杂 态细胞在-70 C 凉存两个月后仍有较理想的转化率。 学 关键词 大肠杆菌: 感受态细胞: 转化能力 物 对感受态细胞转化率的影响， 也对感受态细胞在不 感受态细胞的制备和转化是分子生物学实验室 生 同的冻存条件下转化率的维持情况进行研究。旨在 频繁使用的一项重要的常规操作，可用于基因克隆 胞 通过各方面因素的综合比较， 获得一个最佳应用方 以及文库构建等研究。通常文库构建需要相当高转 化率的感受态细胞，而基因克隆操作对感受态细胞 案。 细 的转化率要求相对较低。 然而， 当用于转化的质粒 DNA(通常是连接产物)量比较少， 特别是同时质粒 1 材料和方法 DNA 长度较长以及连接产物中存在较高含量的杂质