提取香菇多糖方案.doc

提取香菇多糖的工艺 原料处理： 原料：香菇。 试剂：蒸馏水，葡萄糖，苯酚，铝片， 固体，浓硫酸，95%乙醇稀盐酸，PH试纸，复合酶（木瓜蛋白酶：纤维素酶=2：1）， 设备和仪器：100ml容量瓶，6个50ml容量瓶，玻璃棒，蒸馏装置（温度计、沸石、三口烧瓶、冷凝管），烧杯若干，锥形瓶若干，棕色瓶一个，抽滤瓶，1、2、5、10ml吸液管，电子天平，真空干燥箱，恒温水浴锅，紫外分光光度计，粉碎机，40、60、80、100目的筛子， DL700-0.55×1.5超高压等静压机（上海大隆高压设备厂），真空泵，THZ-82A台式恒温振荡器，台式离心机。 1、标准葡萄糖溶液的配制 精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖100.0mg，加蒸馏水溶解并定容于100ml容量瓶中，摇匀，配成浓度为1mg/ml标准葡萄糖溶液备用。 2、5%苯酚试剂的配制。 苯酚水浴加热溶解后称取100g，加铝片0.1g(先用1：6的盐酸除去铝片表面氧化铝后，再称量使用)，加入碳酸氢钠30g，蒸馏，收集178-182℃的馏分，取馏出液7.5g，加入蒸馏水150mL，得5.0％的苯酚溶液，置于棕色瓶中备用。 3、标准曲线绘制 以葡萄糖作为标准品，采用苯酚—硫酸比色法，用紫外分光光度计测定多糖含量。 精密吸取已配制的葡萄糖标准品溶液0.5，1，1.5，2，2.5，3ml置于6个50ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度线，摇匀。精密吸取2ml，分别加入5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入5ml浓硫酸，振摇5min，置沸水浴上加热15min，然后置冷水浴中冷却30min，以溶剂蒸馏水为空白作对照，在400～600nm内扫描，最大吸收波长为490nm。 在490nm处，测吸光值，以浓度为纵坐标，吸光值为横坐标，绘制标准曲线，得出葡萄糖标准品浓度Y（ug/ml）与吸光值X的回归方程：Y=15.336X-0.0298，R2=0.9997。在2.5～15.0 ug/ml范围内呈线性关系。 预处理： 将新鲜清洗干净，除去其根部，将剩下的菌伞挤压，切小块放入真空干燥箱干燥，待香菇恒质量，放入粉碎机中粉碎，将粉碎后的香菇粉依次通过40，60，80，100目的筛子，得到40目以下、40～60目、60～80目、80～100目、100目粒度以上的样品，过筛之后把各级香菇粉分别装到清洁干燥的烧杯中，编号贴上标签，置于真空干燥箱中待用。 一、热水法提取香菇多糖的方案 原料：香菇。 试剂：0.5%NaOH，95%乙醇，蒸馏水。 设备和仪器：烧杯（若干），玻璃棒，温度计，锥形瓶（若干），漏斗，水浴锅，称量天平，THZ-82A台式恒温振荡器,台式离心机，紫外线分光光度计。 提取的方法与步骤： 1、粉碎度对提取率的影响 分别称取40、60、80、100目的香菇粉5g，放入到250mL的锥形瓶中，加入蒸馏水100ml，混合均匀后置于90℃水浴锅中，水浴提取2h，提取两次，提取结束，冷却至室温，将两次提取液混合后过滤，取2ml滤液分别加入5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入5ml浓硫酸，振摇5min，置沸水浴上加热15min，然后置冷水浴中冷却30min，即以溶剂蒸馏水为空白作对照，在490nm处用分光光度计测吸光值，计算多糖提取率，得到粉碎度与提取率的关系。 2、料液比对提取率的影响 称取80目的香菇粉5g六份，放入到250mL的锥形瓶中，分别加入蒸馏水75、100、125、150、175、200ml，混合均匀后置于90℃水浴锅中，水浴提取2h，提取两次，提取结束，冷却至室温，将两次提取液混合后过滤，取2ml滤液分别加入5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入5ml浓硫酸，振摇5min，置沸水浴上加热15min，然后置冷水浴中冷却30min，即以溶剂蒸馏水为空白作对照，在490nm处用分光光度计测吸光值，计算多糖提取率，得到粉碎度与提取率的关系。 3、提取温度对提取率的影响 称取80目的香菇粉5g，放入到250mL的锥形瓶中，加入蒸馏水100ml，混合均匀后置于65、75、80、85、90、95、100℃水浴锅中，水浴提取2h，提取两次，提取结束，冷却至室温，将两次提取液混合后过滤，取2ml滤液分别加入5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入5ml浓硫酸，振摇5min，置沸水浴上加热15min，然后置冷水浴中冷却30min，即以溶剂蒸馏水为空白作对照，在490nm处用分光光度计测吸光值，计算多糖提取率，得到粉碎度与提取率的关系。 4、提取时间对提取率的影响 称取80目的香菇粉5g五份，放入到250mL的锥形瓶中，加入蒸馏水100ml，混合均匀后置于90℃水浴锅中，水浴提取2、3、4、5、6h，提取结束，冷却至室温，将两次提取液混合后过滤，取2ml滤液分别加入5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入5ml浓硫酸，振摇5min，置沸水浴上加