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第四章 蛋白质(Protein)分析 第一节 基础知识 一．概述 蛋白质 ——“protein” 由希腊文转 “最原始的” ——蛋白质： 主要由20多种α－氨基酸以肽键（peptide bond）连接而成的（肽链chain）具有确定构像的生物大分子， 此外许多蛋白质还会有一些非氨基酸成份，如糖、脂、核苷酸、磷酸、金属离子等。 辅基（成键），配基（分子间力） 性质： 分子量从数千――数百万 是生物体重要组成部分，重量上占细胞干重的一半以上，肌肉、皮肤、血液、毛发重要成份 功能上参与几乎所有的生命活动过程， 酶、运输蛋白、防御蛋白、激素蛋白、毒蛋白、受体运动蛋白、结构蛋白 种类 估计1010-1012种 二．结构 蛋白质结构异常复杂，分为四级描述 （一）一级结构（primary structure） 指肽链中的氨基酸排列顺序（序列），也包括二硫键的定位。（蛋白质结构的基础） 1．肽键 peptide bond 结构式 R1 H R1 O H ? ? ? ?? ? NH2?C?COOH + NH2?C?COOH ? NH2?C?C—N—C—COOH ? ? ? ? ? H R2 H H R2 羧基 氨基 肽键 不同氨基酸首尾相接 一般肽键反式结构 肽链 peptide chain ——由肽键连接而成多氨基酸链 ——结构式 R1 O H O R3 ? ?? ? ?? ? NH2?C—C—N—C—C—N—C—COOH ? ? ? ? ? H H R2 H H N端残基 残基 C端残基 形成肽键后，氨基酸失水成为“氨基酸残基” residue “链中氨基酸单元” 结构式习惯写法 N端在左 C端在右 多肽 （polypeptide） 2个氨基酸残基 肽链 二肽 3个氨基酸残基 肽链 三肽 〉〉10－12氨基酸残基 肽链 多肽 〉数十氨基酸残基 肽链 蛋白质 蛋白质≥多肽 二硫键 disulphide bond ①形成 NH2 ? H??C??CH2SH ? COOH 半胱氨酸 Cysteine (Cys)分子中两SH在碱性pH下，易氧化成硫－硫键（二硫键） 结构图 —SH + —SH + O2 ? —S—S— + H2O ②种类 链内二硫键 同一肽链内Cys间 链间二硫键 不同肽链内Cys间 5.蛋白质一级结构 牛胰岛素肽链结构图 1953年，英国Sanger测序 5700MW 中国 6年9个月 1965年首先合成结晶胰岛素 二级结构 （Secondary structure）C=O 形成氢键 ③β－折叠 片结构（pleated sheet structure）） （四）四级结构 （quaternary structure） 4.也有蛋白仅有一个肽链，结构仅到三级结构为止 结构性质 1．一级结构（化学键）是基础 ——高级结构取决于一级结构？ ——不同一级结构，高级结构不同； ——同一级结构，高级结构同？ 二、三、四――高级结构 ——决定外形，内部结构， ——蛋白活性，功能，直接关系，一级结构 共价键 蛋白质高级结构，具有稳定性，可变性 稳定性――非共价键分子间作用力，氢键，离子键。 疏水性，范德华力等，1/90 共价键 可变性――活性改变， ——化学反应 ——易变性：热，紫外线，酸碱，表面活